第3章 病毒和类病毒.pptVIP

病毒(virus)的概念 形体微小，结构简单，仅含有1种核酸DNA或RNA，具有超级寄生性，且必须在电子显微镜下才能观察到的一类非细胞形态的微生物。 病毒与其它微生物的区别 电子显微镜法(利用负染法) 微生物的大小比较 病毒的外形 颗粒样球状或近球形 腺病毒 杆状或丝状 烟草花叶病毒 弹状 狂犬病毒 砖形 痘病毒 蝌蚪形 噬菌体 病毒的抵抗力 一般而言，病毒的抵抗力较弱； 特别是耐高温力更弱，易被杀灭或致弱,大多数病毒经60℃30min即可灭活； 低温则适宜病毒的生存。 常在低温保存病毒：-20 ℃ ~-70 ℃ 可保存几个月。 病毒对各类射线比较敏感,受直射日光或紫外线照射能杀灭或致弱病毒。 一般病毒在pH6~9较稳定,常用酸性或碱性消毒剂消毒. 70%酒精和重金属盐能杀灭病毒。 化学消毒剂中碱性物质杀灭病毒效果最佳,几乎所有病毒都被甲醛灭活,但是仍保持抗原性,故用于疫苗生产.。 有囊膜病毒对乙醚敏感，而对甘油则有抵抗力。常用50%甘油生理盐水保存含病毒的材料。 多数抗生素对病毒无效. 第四节 病毒的复制 病毒在活细胞内，以其基因为模板，在酶的作用下，分别合成病毒基因及蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这种方式称为复制（replication)。 从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制和病毒蛋白合成，至释放出子代病毒的全过程，称为一个复制周期。 病毒的复制周期主要包括吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装和释放五个连续步骤。 一、吸附和穿入 （一）吸附(adsorption) 分两个阶段： 静电吸附：病毒体与细胞接触，进行静电结合。非特异性、可逆。 真正的吸附：病毒体表面位点（蛋白质结构）与宿主细胞膜上相应的受体结合。是决定病毒感染的真正开始。 裸露病毒的吸附 （二）穿入(penetration) 病毒体吸附在宿主细胞膜上后，可通过数种穿入方式进入细胞： 病毒胞饮 (1) 膜融合后进入 (2) 病毒胞饮 二、脱壳(uncoating) 不同病毒脱壳方式不一，多数在宿主细胞溶酶体酶作用下脱壳，释放出基因组核酸。 三、生物合成(biosynthesis) 病毒基因组一旦从衣壳中释放后，就利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量的病毒核酸和结构蛋白。 早期，病毒复制合成所必需的复制酶和一些抑制蛋白 生物合成阶段，病毒处于隐蔽期 根据病毒基因组如何转录成mRNA、如何指令合成蛋白质，病毒的生物合成过程可基本归为6大类：双股DNA病毒、单股DNA病毒、单正股RNA病毒、单负股RNA病毒、逆转录病毒和双股RNA病毒。 （二）病毒的培养 病毒为严格的细胞内寄生物，仅可以在活细胞内才能增殖。 病毒培养的基本要求是： 对病毒敏感的细胞； 不被其他微生物污染的细胞培养介质 病毒的分离培养 动物接种 禽胚培养 细胞培养 1、动物接种 是增殖病毒常采用的一种途径。 但动物的品质对增殖病毒的生物学性状影响极大。直接或间接地干扰了实验研究结果和生物制品的质量。 所以自从细胞培养广泛使用后，实验动物已经很少使用。 鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多病毒的生长增殖。 在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒，脑炎病毒，包疹病毒尤其在禽类病毒的研究上应用较多。 可用于病毒分离、鉴定、抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已经不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。 3、细胞培养（cell culture） 细胞培养是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2-4个细胞团悬液进行培养。 细胞培养已经成为培养病毒的主要方法。 细胞培养的优点： 每个细胞生理特性基本一致，克服个体差异； 能显示病毒的生长特性； 能排除特异性抗体或非特异性抑制因子的干扰； 细胞培养可以执行严格的无菌操作。 可以进行许多检验项目 病毒的克隆只能应用细胞培养的空斑技术来完成。 细胞培养方法 随着生物技术的发展，细胞培养的方法也日益增多，目前在兽医生物制品上使用的有下列几种方法： （1）静置培养 （2）转瓶培养 （3）悬浮培养 （4