药品微生物发限度检查方法介绍.ppt

药品的卫生学检查方法介绍 （北京市药品检验所 戴红） 无菌室的要求 位置选择 面积大小 洁净度 采光 紫外杀菌 门 人流物流 地面墙面 无菌室的管理 陈设尽量简单，仅放置必需用的仪器设备 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭擦拭操作台及可能污染的死角，室内无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。 人员：肥皂洗手， 0.1%新洁尔灭洗手，换无菌服、鞋，进入。 操作必须符合无菌要求，穿好无菌服后，不能反复出入无菌间，手不能来回出入操作台。 在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去空气湿气，用紫外灯杀菌半小时。 非无菌室工作人员不得进入，对外来维修人员要进行监督。 缓冲间不得放杂物、培养箱等。 定期对门、窗、墙面等消毒。 定期检查洁净度情况。 洁净度的要求 应在环境洁净度10000级局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须无菌。 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游 菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 菌种保存、复壮及管理 保存原则?????????? ? 保存方法 复壮 管理 菌种的保存原则 挑选特征典型的纯菌菌落 确定保存的合适菌体形态，凡能产生孢子或芽孢的微生物都用孢子或芽孢保存 选择最适宜的保存方法进行保存 定期对保存的菌种进行检查 菌种保存的常用方法 琼脂斜面低温保存法 甘油冷冻管保藏法 半固体琼脂斜面低温保存法 液体石蜡保存法 超低温保存法（菌种） 砂土 菌种的复壮 分离纯化：琼脂平板分离、单细胞（菌体或孢子）的分离 通过宿主复壮 淘汰退化 理化因素诱变 菌种的管理 专人管理，加锁保存在冰箱内，保存菌种的冰箱不得放置食品及易挥发性试剂及有机溶媒等 定期有专人按操作规程进行传代接种 菌种定期检查，发现染菌及变异现象应及时报告，研究处理。 实验菌种不得任意带出 使用致病菌时应及时通知保管人员，用后必须及时处理 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104] 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64941] 白色念珠菌(Candida albicans) [CMCC(F) 98001] 黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F) 98003] 大肠埃希菌(Escherichia coli)) [CMCC(B) 44102] 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63501] 菌液的制备（1） 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤中， 30～35℃培养18~24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5 ~10-7，使细菌数约为10~100cfu/ml。 菌液的制备（2） 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中， 23～28 ℃培养18~24小时，取此培养物1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5 ~10-7，使细菌数约为50~100cfu/ml。 菌液的制备（3） 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28 ℃培养5～7天，加3~5ml0.9％无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液，取1 ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4~10-6，使细菌数约为50~100cfu/ml。 药品微生物限度检查方法介绍 2005年版微生物限度标准的应用 微生物限度检查法：检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。 药品的生产、贮存、销售过程中的检验，原料及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度检查均以本标准为依据。 检查项目：细菌数、霉菌数、酵母菌数及 控制菌的检查。 2005年版微生物限度标准的分类 1、制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂 应符合无菌检查法的规定。 2、口服给药制剂 3、局部给药制剂 3.1. 用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂无菌 3.2. 眼部给药制剂： 3.3、耳、鼻及呼吸道吸入给药