细胞生物学实验指导书09年..docVIP

实验一 普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造 光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力 3．油镜的 HYPERLINK /eduonline/wswx/mainmenu/menu4/mainM-41.htm \l ##### 使用原理 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光源 2．显微镜观察 （1）低倍镜观察 （2）高倍镜观察 （3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 3．显微镜用毕后的处理 观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。 五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 实验二 胞间连丝的观察 一、实验目的 观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识． 二、实验原理 植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。 三、实验材料 红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片 四、实验步骤 1.剪取一小块红辣椒．用小刀小心刮除果肉． 2.将上述刮除果肉后极薄的表皮放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片，即可往显微镜下观察。镜检时光线宜稍暗。 五、实验报告 绘图：胞间连丝图 实验三 密度梯度提取叶绿体 一、实验目的：了解密度梯度提取叶绿体的方法。 二、实验原理：在不同的密度梯度条件下离心，叶绿体和沉降系数比它小的物质会停留在不同梯度的交界处，而其它细胞组分怎会沉淀咋离心管的底部。 三、实验试剂：15%蔗糖溶液；1000ml 50%蔗糖溶液；1000ml 匀浆介质； 1000ml 四、实验步骤： 1.选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称5g放于研钵中，加入10ml匀浆介质，迅速研磨。 2.匀浆液用2层纱布过滤于50ml烧杯中。 3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。弃去沉淀。 4.取新的离心管分别加入15%和50%蔗糖溶液各1.5ml形成梯度，在加入2ml的上清液 5.在5000r/min下离心20min。弃去上清，沉淀即为叶绿体。 6.取一滴叶绿体悬液滴于载片上，加盖片观察： 五、作业 1.叶绿体是否分离纯净？分析原因？ 2.整个实验要在低温下迅速完成是何道理？ 实验四 PEG诱导动物细胞融合 一、实验目的 了解细胞融合的基本原理,并掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。 二、实验原理 PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通成为可能,从而造成细胞之间发生融合.。 三、实验试剂 生理盐水；GKN 液；Alsver 液；50%聚乙二醇 四、实验步骤 采取鸡血 ↓加入Alsver 液 取混合液1ml ↓加入4ml生理盐水 混合液 ↓1200r/min，离心三次，5min,5min,10min 取血细胞沉淀 ↓加入适量GKN 液稀释 取适量稀释液滴于载玻片 ↓滴加PEG（稀释液的1/2）静置3min 镜检 五 作业 图绘所观察到的细胞融合。 实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察 实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。 实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮兰R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。 实验试剂： 1、M-缓冲液； 2、pH6.