免疫学检查在结病诊断中应用结核病国际论坛.ppt

免疫学检查在结核病诊断中的应用 山东省胸科医院 邱丽华 二00七年六月 结核分枝杆菌抗原性的研究 旧结核菌素（OT）: 纯化蛋白衍生物（PPD） 24kDa抗原MPT64 ESAT-6 CFP10 38kDa蛋白 脂阿拉伯甘露糖（LAM） 体内免疫细胞功能测定：皮肤试验 TST ＯＴ：结核菌液体培养基中提取的含结核菌体蛋白及代谢产物 ＰＰＤ： 1932年在旧结素的基础上发现，由结核菌菌体制取的纯蛋白衍生物，提高了此反应的敏感性，减少了非特异性反应 PPD 虽称为纯化蛋白衍生物，实际上是一种相当复杂的混合物，包含有多种抗原成分 与单一抗原不同，多克隆抗原可补充大量抗原特异性T细胞到抗原注射部位以产生特有尺寸的皮肤反应 PPD缺点：敏感性和特异性不高 结核杆菌和艾滋病病毒（HIV）混合感染以及其他原因致免疫功能受损时，PPD试验有可能呈现假阴性。 非结核分支杆菌等环境分支杆菌感染、接种BCG，可能呈现假阳性 。 由于PPD的上述缺点，使许多病例被误诊而错过了治疗时机。 24kDa抗原MPT64 诱发中等度淋巴细胞应答，而且仅见于少数结核病人中 结核病人中仅有6%对MPT64皮下注射呈阳性反应 用大剂量MPT64斑点试验评估时发现，该抗原区别病人和健康者的特异性达100%，敏感性为98.1% 用MPT64诊断结核病，必须解决这种矛盾的结果是否反映研究的人群或计划不同的问题 抗原存在于几个株中，意味着它用于诊断的复杂性 ESAT-6 主要存在于致病性结核杆菌而不在于大多数非结核分支杆菌、BCG 含有多个T淋巴细胞表位，所以ESAT-6试验可能在不同人群中诱发应答 结核病人中分泌IFN-γ的淋巴细胞能识别ESAT-6抗原 在结核病人中诱发的免疫应答，远比其他分支杆菌蛋白强烈 ESAT-6 在结核病低发国家（丹麦、美国、德国和科威特）的研究表明，结核病人对ESAT-6的应答率为60%～80%，而在健康人中没有出现应答 Lalvani等用IFN-γ特异性ELISPOT计数ESAT-6特异性T细胞，发现诊断敏感性超过90%，而且在健康者中未见反应 ESAT-6 首次成功地区别结核病人和接种BCG的健康者 用Quanti-FERON试验来诊断疾病的评估中，接种BCG 5个月后，54名Quanti-FERON阴性的健康者中有11名PPD体外试验阳性 接种BCG者中没有一人发生ESAT-6阳性 ESAT-6 是区别结核分支杆菌和非结核分支杆菌的最佳候选抗原 在鸟型结核杆菌感染病人中没有发生应答，而其中大多数病人对PPD有强烈反应。 CFP10 和ESAT-6一样都是从结核杆菌培养滤液中发现的 仅分布于各型结核杆菌中 和ESAT-6一样经常出现在结核病人中，但在BCG中没有该类分子，同样也不出现在接种BCG的健康人中 豚鼠经气溶胶或静脉感染结核杆菌，可引发皮肤迟发型超敏反应，而用BCG和鸟型结核杆菌则不引起反应 38kDa蛋白 是一种脂蛋白和主要免疫原 Haslov等比较了5种结核杆菌抗原，发现38kDa蛋白的免疫学活性最强 是结核杆菌的主要免疫原 缺乏抗38KD抗体的血清很难与结核杆菌其它抗原发生反应 38kDa蛋白 诱发豚鼠迟发性超敏反应（DTH）的效果优于其它单一抗原 用于结核病血清学检测敏感性和特异性较高 有很好的应用前景 脂阿拉伯甘露糖（LAM） 分枝杆菌所特有的的细胞壁成分，具有特异性 较强的免疫原性可刺激机体产生相应的抗体 在结核病的血清学诊断中，其敏感性在50%～75%，特异性在50%～75% 抗原混合物研究 单独使用CFP10做为抗原检测结核病患者血清中的特异性抗体，敏感性低 CFP10与38KD蛋白联合应用时，能检测出对38KD抗原缺乏反应的结核病患者血清中特异性抗体 在保持高特异性的基础上，可以弥补38KD抗原对涂片阴性结核病患者检测敏感性的不足 抗原混合物研究 朱中元等 以38KD蛋白和蛋白16以及脂阿拉伯甘露糖（LAM）生产了MTB多种抗原的抗体检测蛋白芯片系统，并进行了临床应用实验，取得较理想的快速诊断效果 Vanpinxteren等用CFP10和ESAT-6的混合抗原采用皮试法及IFN-γ释放实验（IGRA）法诊断豚鼠、牛及人 MTB感染获得的敏感性均比单一抗原要高，而特异性没有显著性差异 抗原混合物研究 Lyashchenkok等 研究了10种MTB重组抗原诊断结核病的价值 实验结果表明，鸡尾酒式MTB特异性复合抗原比任何一种单价特异性结核抗原皮试都有意义 抗原混合物研究 这是由于MTB与感染者都存在个体差异，用单一纯化抗原作皮试抗原，其抗原决定簇不足以激活所有的T细胞引起DTH 而鸡尾酒式特异性复合抗原成分仍保持各