干细胞综述--田洁.doc

研究生课程考核试卷 （适用于课程论文、提交报告） 科 目： 干细胞生物学 教 师： 罗庆 姓 名： 田洁 学 号： 20121902057 专 业：细胞/组织工程与生物材料 类 别： 学术型 上课时间： 2012 年 9 月 至 2013 年 1 月 考 生 成 绩： 卷面成绩 平时成绩 课程综合成绩 阅卷评语： 阅卷教师 (签名) 重庆大学研究生院制 诱导多功能干细胞的研究及应用 田洁 摘要：诱导多功能干细胞(iPS)在具有ES细胞特性的同时，又避免了ES细胞研究领域的免疫排斥和伦理道德问题。因此，iPS细胞在理论研究和临床应用等方面都极具应用价值。文章对iPS细胞诱导的兴起、发展及其最新研究进展进行了综述并探讨了iPS细胞研究领域面临的问题。 关键字：诱导多功能干细胞；重编程；进展 1 引言 诱导多功能干细胞( induced pluripotent stemcells，iPS cells) 研究是近年来生命科学领域的重大突破。2006年8月日本京都大学Shinya Yamanaka课题组首先在《Cell》期刊上发表文章，证实了iPS细胞产生的可能性［1］。由于其具有非常诱人的应用前景，在最近几年中迅速成为生命科学领域研究的热点问题，并于 2008年被《Science》评为年度十大科技进展最高奖，Yamanaka更因此获得了2012年诺贝尔生理学或医学奖。本文从iPS细胞的研究现状、iPS细胞的应用研究进展及前景与展望等3个方面进行了概述。 2 ips细胞的研究现状 2.1 供体细胞选择 继Takahashi等利用OSKM 4种因子将小鼠成纤维细胞诱导成具有胚胎干细胞特性的多功能细胞后，研究人员便开始检测这些特定因子能否对不同物种、不同组织来源的细胞进行重编程。2007-11/12，Takahashi[2]和Yu[3]两个研究小组几乎同时独立宣布成功将人体皮肤成纤维细胞重编程为iPSCs。不同的是 Yamanaka等[2]是通过反转录病毒载体将 Oct3/4、Sox2、Klf4、c-Myc 导入成纤维细胞中，并引入反转录病毒的亲和受体 Slc7al 以提高人 iPSCs 形成效率；而Yu 等[3]则借助慢病毒载体将Oct4、Sox2、Nanong 和Lin28 转进细胞中，并采用 Oct4 筛选系统获得表型与多向分化潜能均与胚胎干细胞相似的iPSCs。近来，通过使用一种药物可以将绵羊成纤维细胞诱导为 iPS 细胞[4]。这种 iPS 细胞有正常的核型，形态学上与人的 ES 细胞相似，能够表达Oct4、SOX2、Nanog和细胞表面标志 SSEA-4，且能形成胚体（EB）和畸胎瘤。随后，使用自定义的Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog、Lin28、SV40 large T和hTERT因子，将绵羊体细胞重编程为iPS细胞[5]。 2.2 iPS 细胞的诱导转化率 iPS 细胞最初的诱导效率极低，主要原因很可能与逆转录病毒转染基因导入手段的缺陷有关；病毒的转染效率不能达到100%，因而获得4个因子表达的细胞比例就更低了。2008年，Zhao等[6]通过将多种因子同时联合4个必须的转化基因（Oct4、Sox2、c-Myc和 Klf4）诱导 iPS 细胞，利用一个筛选平台，对所谓的多种因子进行筛选，发现p53和UTF1siRNA 两种因子可显著提高iPS的转化效率。将这两种因子与4个转化基因一起转染到人成纤维细胞后，可以将iPS细胞的转化效率提高100倍左右。2010年，德国研究小组报道，蛋白质Brg1、Baf155和Ini1可以显著提高体细胞转化为多能干细胞的效率[7]。而这一问题若无法解决，研究者们则无法对于每个iPS细胞均是否已彻底完成了再编程进行判断，也无法获得更为高效、安全的手段来诱导iPS细胞［8-9]。在生物反应器中，应用悬浮液搅拌技术，可以更高效的获得ESCs［10］。 起初只是通过成纤维细胞诱导iPS细胞，随后不同类型的细胞相继被用于诱导iPS细胞，如成纤维母细胞、肝细胞、胃上皮细胞、胰腺细胞、神经前体细胞、肾上腺、肌肉细胞、间充质干细胞、表皮干细胞、脐带及羊膜细胞和造血细胞等。Kaji 等[11]发现，不同组织体细胞诱导重编程所需转录因子的水平不同，形成 iPSC