农杆菌介导的转化方法.pptVIP

农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri质粒)上有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时,这段DNA可以转移进植物细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基因,最终能通过有性世代遗传给子代 。 农杆菌介导转化法 根瘤 存在于能引起植物形成冠瘿瘤的农杆菌中，诱导双子叶冠瘿瘤形成，又称肿瘤诱导质粒（tumor inducing plasmid）。 ① Ti质粒 * 改造后的Ti质粒载体模式 left right M C S AMPr ori Vir select 第一步:植物受伤 植物受伤后能分泌酚类化合物（如乙酰丁香酮、?羟基乙酰丁香酮），诱导Ti质粒上的毒性基因表达。 ② 农杆菌的感染和生存 第二步 感染植物 农杆菌吸附于植物的表面伤口部位（常在茎的基部）。 第三步 毒性基因（vir）表达 T-DNA上的产物催化产生过量的生长素和细胞分裂素，形成植物冠瘿瘤。 virA、virG、virD、virB… 第四步 T-DNA转移 第五步 诱导冠瘿瘤 T-DNA被vir基因产物切下来，并运送到植物细胞核里，整合到植物基因组中。 第六步 土壤农杆菌代谢冠瘿碱。 1、共培养法 包括原生质体共培养、悬浮细胞共培养和愈伤组织共培养。 2、叶圆盘法 3、活体接种法 ④农杆菌转化的方法 1.共培养法 The co-integration method 农杆菌共培养侵染 愈伤组织 分化生芽 生根 2.叶盘转化法 3.活体接种法