实验二层析练习.pptVIP

* * 实验二：层析练习 一、实验目的 1、学习层析法的原理和方法； 2、掌握比移值的计算方法，了解比移值的影响因素； 3、掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法。 二、实验原理 薄层色谱常用TLC表示，依照采用的薄层材料性质和物 理、化学原理的不同，可分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、 离子交换薄层色谱和排阻薄层色谱等。 吸附薄层色谱采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，将样 品以毛细管点在原点处，用移动的展开剂将溶质解吸，解吸出 来的溶质随着展开剂向前移动，遇到新的吸附剂，溶质又会被 吸附，新到的展开剂又会将其解吸，经过多次的解吸-吸附-解 吸的过程，溶质就会随着展开剂移动。吸附力强的溶质随展开 剂移动慢，吸附力弱的溶质随展开剂移动快，这样不同的组分 在薄层板上就得以分离。一个化合物在吸附剂上移动的距离与 展开剂在吸附剂上移动的距离的比值称为该化合物比移值Rf 。 展开剂是影响色谱分离度的重要因素。一般来说，展开剂的极性越大，对特 定化合物的洗脱能力也越大，一般常用展开剂按照极性从小到大的顺序排列大概为： 石油醚己烷甲苯苯氯仿乙醚THF乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水乙酸。 三、实验步骤 1．制板： 将硅胶加 1％ CMC，调成桨状(硅胶：CMC=1:3~4)（在平铺玻璃板上能晃动 但不能流动），将其涂在载玻片上（100mm×25mm）），为使其坦平，可将载 玻片用手端平晃动，至平坦为止，放在干净平坦的台面上，晾干之后放入105℃烘 箱活化1小时，取出放入干燥器内待用。 2、叶绿素的提取 在研钵中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解 冻后包在纸中轻压吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液，适当研磨。将 提取液用滴管转移至分液漏斗中，加人10 mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除 去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥 形瓶中,加2g入无水Na2SO4干燥。干燥后的液体倾至另—锥形瓶中(如溶液颜色 太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。 3、点样 用一根内径 1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点 在距薄板一端1.5cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。若 一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但 点样斑点直径不得越过2mm。 手动点样机 自动点样机 4、展开 先在层析缸中放入展开剂[石油醚（60~90℃）-丙酮—乙醚(体积 比为3:1:1)]，加盖使缸内蒸气饱10min， 再将薄层板斜靠于层析缸 内壁。点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层祈缸。 待展开剂上升到距薄层板另一端约1crm时，取出平放，用铅笔或 小针划前沿线位置，晾干或用电吹风吹干薄层。