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2．4．1制备前的准备工作…………………………………………………………．16
2．4．2柠檬酸三钠还原法制备胶体金……………………………………………．16
2．5胶体金质量鉴定………………………………………………………………．．17
2．6胶体金标记抗体蛋白…………………………………………………………．．17
2．6．1抗体蛋白处理………………………………………………………………．17
2．6。2胶体金标记抗体最适pH的确定…………………………………………．。17
2．6．3胶体金标记抗体最适蛋白量的确定………………………………………．17
8
2．6．4胶体金标记抗体……………………………………………………………．1
2．6．5胶体金标记抗体的纯化及鉴定……………………………………………．18
2．7免疫层析试纸条层析条件的优化…………．．．．…………………………………18
2．7．I抗原包被量和金标抗体稀释倍数的测定…………………………………．18
2．7．2硝酸纤维素膜的选择………………………………………………………．18
8
2．7．3包被抗原稀释液及标品稀释液的优化……………………………………．1
2．7．4封闭液的选择及封闭条件的优化…………………………………………．18
2．7．5金标结合释放垫泡垫的配方优化…………………………………………．19
2．7．6试纸条的组装及检测方法原理……………………………………………．．19
2．8免疫层析试纸条检测限的确定………………………………………………．．20
2．9试纸条方法特异性的检测……………………………………………………．．20
2．9．1与氨基糖苷类药物的交叉反应……………………………………………．20
2．9．2与其他族兽药的交叉反应…………………………………………………．20
2．10重复性实验……………………………………………………………………20
2．1l免疫层析试纸条检测实际样品………………………………………………．20
2．11．1样品的基质影响消除………………………………………………………21
2．11．2添加回收实验………………………………………………………………21
2。12试纸条稳定性实验……………………………………………………………21
2．12．14。C稳定性实验……………………………………………………………．．21
2．12．237℃稳定性实验……………………………………………………………21
2．13免疫亲和柱快速检测方法的建立……………………………………………21
2．13．1免疫亲和凝胶的制备………………………………………………………21
2．1
3，2检测柱酶标标准品稀释倍数及凝胶层的优化……………………………22
2．13t3免疫亲和检测柱的制备……………………………………………………22
2．13，4免疫亲和检测柱的检测原理及步骤………………………………………23
2．13．5检测柱检测限的确定………………………………………………………24
2．13．6实际样品的检测……………………………………………………………25
2．1
4酶联免疫吸附法验证方法的有效性…………………………………………25
2．14．1酶联免疫吸附法样品前处理方法…………………………………………25
2．14．2酶联免疫吸附法方法步骤…………………………………………………25
3结果与讨论………………………………………………………………………．2。7
3．1庆大霉素多克隆抗体的纯化及测定…………………………………………．．27
3．2胶体金溶液的制备与质量鉴定………………………………………………．．27
3．2．1胶体金的制备………………………………………………………………．27
3．2．2胶体金的质量鉴定…………………………………………………………．28
3．3胶体金标记抗体蛋白…………………………………………………………．．29
3．3．1胶体金标记抗体最适pH的确定…………………………………………．．29
3．3．2胶体金标记抗体最适蛋白量的测定………………………………………．30
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