博士专题：基因功能研究技术之基因敲除及基因编辑技术.ppt

博士专题：基因功能研究技术之  ——基因敲除、基因编辑技术 刘惠荣 内蒙古农业大学生命科学学院 II、基因敲除：可以使基因的功能完全缺失 基因敲除，又称基因打靶，是一种遗传工程技术，是在转染细胞中发生外源打靶基因与核基因组目标基因之间的DNA同源重组，能够使外源基因定点地整合到核基因组的特定位置上，从而达到改变细胞遗传特性的目的。 传统的基因敲除技术依赖于细胞内自然发生的同源染色体的随机交换，但在体细胞内，基因同源重组的效率特别低（低于10-6），增加了实际操作的工作量，限制了该项技术的应用。 1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型，此后基因敲除技术得到进一步的发展和完善，目前该技术已经成为研究基因功能最直接、最有效的方法之一。 基因敲除技术分为完全基因敲除、条件型基因敲除、诱导型基因敲除。 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或动物个体中的靶基因活性。 条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。 诱导型基因敲除是通过对诱导剂给予时间的控制，在动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行敲除的技术。 （一）完全基因敲除 基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 分子都重组到带有标记基因(如neo 基因，TK 基因等)的载体上，成为重组载体。基因敲除是为了使某一基因失去其