1材料和方法-南京医科大学.docVIP

Galectin-3重组真核表达载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达 胡圳圳 蒋秀琴 高才杰 郑大同* （南京医科大学第二附属医院中心实验室 江苏 南京 210011） [摘 要] 目的：构建半乳糖凝集素-3 （Gal-3） 的真核表达载体，在NIH/3T3细胞中表达，并检测其表达。方法：通过DNA重组技术和PCR方法从人肿瘤细胞克隆Gal-3基因，插入真核表达载体pEGFP-N1中，通过酶切和测序鉴定重组载体的正确性；采用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-Gal-3瞬时转染NIH/3T3细胞，经荧光和Western blot方法检测Gal-3表达，MTT法检测Gal-3对NIH/3T3细胞增殖的影响。结果：限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建含Gal-3的重组真核表达载体pEGFP-Gal-3。以重组质粒瞬时转染NIH/3T3细胞，检测到Gal-3蛋白表达，并证实Gal-3蛋白促进NIH/3T3细胞增殖。结论：成功构建的pEGFP-Gal-3真核表达载体在小鼠NIH/3T3细胞中成功表达，其促进NIH/3T3细胞增殖。 [关键词] 半乳糖凝集素-3；NIH/3T3细胞；细胞增殖 [中图分类号] Q786 [文标识码] A [文章编号] Construction of the recom