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- 2019-01-03 发布于四川
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- | 1991-07-16 颁布
- | 1992-04-01 实施
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中华人民共和 国国家标准
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饲料中细菌总数的测定方法 GB13093一91
Methodfordeterminationofaerobic
bacterialcountinfeeds
本标准参照采用国际标准ISO4833-1978食《品和动物饲料中微生物学检验方法》。
1 主肠内容与适用范围
本标准规定了饲料中细菌总数的测定方法。
本标准适用于饲料中细菌总数的测定。
2 原理
将试样稀释至适当浓度,用特定的培养基,在30士1℃下培养72士3h,计数平板中长出的菌落数,计
算每克试样中的细菌数量。
3 仪器、设备
3.1天平:感量为。.1B=
3.2 振荡器:往复式。
3.3 干热灭菌箱:50^-200士10C。
3.4 高压灭菌锅。
3.5 冰箱:普通冰箱。
3.6 恒温箱:30士1C。
3.7 电炉:可调式。
3.8 平皿:直径为9cm.
3.9 吸管:容量为1,10mL,
3.10 三角烧瓶:容量为250,500mL,
3.11 玻璃珠。
3.12 试管:18X180ram.
3.13 水浴锅:46士1C。
3.14 酒精灯。
3.15 试管架。
3.16 橡皮乳头。
4 检验程序
细菌总数的检验程序如下
国家技术监仔局1991一07一16批准 1992一04一01实施
GB13093一91
5 操作步骤
5.1 采样
采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具,如灭菌
牛皮纸袋或广口瓶,金属勺和刀,在卫生学调查基础上,采取有代表性的样品,样品采集后应尽快检验,
否则应将样品放在低温干燥处。
根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型,分层定点采样,一般可分三层五点或分层随机采样,不同点的
样品,充分混合后,取500g左右送检,小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混
乙、
口 0
海运进口饲料采样:每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品,每层从五点取样混合,如船仓
盛饲料超过10000t,则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。
5.2 试样稀释及培养
5.2.1无菌称取试样10.0g,放人含有90mL稀释液的灭菌三角烧瓶内(瓶内预先加有适当数量的玻
璃珠)。经充分振摇,制1:10的均匀稀释液。最好置振荡器中以8000^10000r/min的速度处理2^-3
m5.in2.,2
用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁慢慢注人含有9mL稀释液的试管内(注意吸管
尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,作成1:100的稀释液。
5.2.3 另取一支1mL灭菌吸管,按上述操作顺序,作1。倍递增稀释,如此每递增稀释一次,即更换一支
吸管。
5.2.4 根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计,选择2-3个适宜稀释度,分别在作10倍递增
稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
5.2.5 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46士1℃的平板计数用培养基(可放置46士1℃水浴锅内保温)
注入平皿约15mL,小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。从稀释试样到倾注培养基之间,时间不能
超过15min,
如估计到试样中所含微生物可能在琼脂平板表面生长时,待琼脂完全凝固后,可在培养基表面倾注
GB13093一91
凉至46土1C的水琼脂培养基4mLe
5.2.6 待琼脂凝固后,倒置平皿于30士1℃恒温箱内培养72士3h取出,计数平板内菌落数目,菌落数
乘以稀释倍数,即得每克试样所含细菌总数。
5.3 菌落计数方法
作平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时借助于放大镜检查,以防遗漏。在计数出各平板菌落数
后,求出同一稀释度两个平板菌落的平均数。
菌落计数的报告
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落计数标准。每一稀释度采用两个平板菌落的平均数,如
两个平板其中一个有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的
菌落数,如片
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