GB/T 18651-2002牛无浆体病快速凝集检测方法.pdf

GB/r18651-2002 前 言 过去认为无浆体((anaplasma)是原虫，现确定是一种立克次氏体，译名还有微粒抱子虫、无形体等， 根据生物学特征，“无浆体”最为确切，因此本标准中用此名。牛无浆体病是一种牛血液传播病。牛一旦 感染，即可成为终生带虫者，使养牛业造成很大经济损失。世界动物卫生组织仁WorldOrganizationfor AnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE〕将本病列为B类传染病，本病也是我国 出人境动物检疫对象之一。 OIE推荐诊断牛无浆体病的方法中，卡片凝集检测具有微量、快速、灵敏度高和特异性好等优点，故 得到广泛应用。我国曾报道过用补体结合试验诊断牛无浆体病，但因部分血清有抗补体作用，而常被误 判，目前，国内尚无卡片凝集检测标准。 本标准以(ME推荐技术为依据，参考了澳大利亚和美国检测方法，抗原保存期为一年到三年，试验 温度范围为25C-28C, 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:农业部动物检疫所。 本标准主要起草人:吴鉴三、张肖正。 中华人 民共和 国国家标准 牛无浆体病快速凝集检测方法 cs/T18651-2002 Methodsoffastagglutinationtest forbovineanaplasmosis 1 范围 本标准规定了牛无浆体病快速凝集检测方法 本标准适用于牛无浆体病的诊断。其他动物无浆体病的诊断亦可参照本方法。 2 试剂和器械 2.1 试剂 a)无浆体凝集抗原，4℃保存; b)阴性协同血清(牛血清因子)，一70℃一一80℃保存; 。)阳性对照血清，一20C保存; d)阴性对照血清，一20℃保存。 以上试剂由制标单位提供。 2.2 器械 2.2.1 微量移液器:5kL,10AIL或5醉~25ut(连续可调) 2.2.2 微量移液器头若干个。 2.2.3 试验用板:取85mmX12.5mm洁净透明塑料平板，用油漆或油性记号笔划成4排X6个区位。 3 操作步骤 实验应在25C^-28℃环境下进行。 3.1被检血清按常规采集和分离，从采集到第一次检测前，要在室温放置38h-48h,然后冷藏或冻存 备用，长期低温保存会使阳性率下降。 3.2 取出凝集抗原、阴性协同血清、阳性和阴性对照血清以及被检血清，在250C-28℃下放置 15min一20min, 3.3 同时在平板第一排左起 1,2区位划上阳性(+)和阴性(一)符号，其余各区位依次编上被检血 清一号。 3.4 用微量移液器在编号区位内按号分别加阳性、阴性对照血清和待检血清10pL 3.5 在各区位加凝集抗原5可一，靠近血清，互不接触。 3.6 在各区位抗原旁加阴性协同血清10[A-，互不接触。 3.7用牙签将各区位的三种反应物摊成液面(约成人小指甲盖面积)，混合均匀。做一份血清换用一根 牙签。 IB 用手轻轻晃动该平板，在4min-8m。内，当阳性对照血清开始出现凝集反应时，对着黑色背景 判读结果。 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002一02一19批准 2002一05一01实施 217 GB/T18651-2002 4 判定标准 4 1 阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象。 4 2 . 阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒。 们 被检血清凡出现可辨认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应。