GB/T 19524.1-2004肥料中粪大肠菌群的测定.pdf

ICS65.080 B 10 荡日 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T 19524.1-2004 肥料中粪大肠菌群的测定 Determination offecalcoliformsin fertilizers 2004-05-31发布 2004-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发 布 中 国 国家 标 准 化 管 理 委 员 会 GB/T 19524.1-2004 前 言 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人:曹风明、沈德龙、李俊、姜听、李力。 GB/T19524.1-2004 肥料中粪大肠菌群的测定 1 范围 本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。 2 定义 下列定义适用于本标准。 粪大肠菌群 fecalcoliforms 一群在44.5℃士。.5℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 粪大肠菌群数为每克(毫升)肥料样品中粪大肠菌群的最可能数(MPN). 3 仪器设备 高压蒸汽灭菌器;显微镜;恒温水浴或隔水式培养箱;恒温旋转式摇床;干燥箱;天平;酸度计或精密 pH试纸;接种环;试管(15MMX150mm);小套管(杜兰管);移液管;三角瓶;培养皿;载玻片;玻璃珠; 酒精灯;试管架。 4 培养基和试荆 4.1培养基:遵照附录A的规定。 4.2 革兰氏染色液:遵照附录B的规定。 5 检验 步骤 5.1 样品稀释 在无菌操作下称取样品10.0g或吸取样品10mL，加人到带玻璃珠的90mL无菌水中，置于摇床 上200r/min充分振荡30min，即成 10-稀释液。 用无菌移液管吸取5.0MI上述稀释液加人到45mL无菌水中，混匀成 10-1稀释液。这样依次稀 释，分别得到10-,10 等‘浓度稀释液(每个稀释度须更换无菌移液管)。 5.2 乳糖发酵试验 选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液 1.0mL加人到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接 种3支发酵管，置44.5℃士。.5℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h士2h。如果所有乳糖胆盐发酵 管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性;如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按5.3进行。 5.3 分离培养 从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃士1℃条件 下培养 18h-24h 5.4 证实试验 从 5.3分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性;如果为革 兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5℃士。.5℃条件下增养24h士2h, 观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性;产气为粪大肠菌群阳性。 5.5 结果 证实试验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克(毫升) 肥料样品中的粪大肠菌群数。 GB/T19524.1-2004 附 录 A (规范性附录) 培养基 A.1 乳糖胆盐发酵培养基 蛋白陈 20.0g 猪胆盐 5.0g 乳糖 10.0g 。.00