LFA1基因敲除鼠胶原诱导风湿性关节炎发病率及程度的降低.doc

中国生物工程杂志China Biotechnology, 2006, 26(2):34～38 LFA1基因敲除鼠胶原诱导风湿性关节炎 发病率及程度的降低* 王轶楠王世瑶柳忠辉**崔雪玲台桂香 （吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林省神经免疫重点实验室长春130021） 摘要淋巴细胞功能相关抗原（LFA1）属于黏附分子家族，在细胞相互作用中发挥重要作用。通过观察LFA1基因敲除小鼠的胶原诱导关节炎(CIA)发病率、放射线学及组织学变化，探讨LFA1分子在CIA发病中的作用。实验采用100μg的二型胶原(CII)加弗氏完全佐剂充分混合，在LFA1基因敲除小鼠及正常对照组小鼠尾根部皮内注射，21天后重复免疫一次，随后进行发病率、放射线学及组织学分析。研究结果显示，CII免疫后，正常对照组小鼠平均发病率为57%，临床可见明显的放射线及组织学的异常变化。而LFA1基因敲除小鼠无发病，放射线及组织学检查亦无明显异常改变。上述结果提示LFA1在胶原诱导的关节炎发病中起重要作用。 关键词LFA1胶原诱导的关节炎类风湿性关节炎 中图分类号Q789 收稿日期：20050825修回日期：20051110 * 吉林省科技厅国际合作项目6) ** 通讯作者，电子信箱：liuzh@mail.jlu.edu.cn类风湿性关节炎（RA）是以关节及关节软骨损伤为特征的慢性自身免疫性疾病。目前认为，类风湿关节炎的发病是多因素的，遗传、感染、激素和环境因素相互作用造成免疫功能失调，导致疾病的发生和发展。免疫因素在疾病发病过程中发挥重要作用，表达在不同细胞表面的黏附分子构成了关节和滑膜部位的免疫微环境，在关节炎发病过程中，黏附分子的表达在细胞因子的刺激下发生上调，促进炎症细胞之间的黏附及炎症细胞向局部的趋化反应，从而促进疾病的发生、发展。在各种黏附分子中，淋巴细胞功能相关抗原1（lymphocyte function associated antigen1, LFA1）通过与其配体黏附分子1（intercellular adhesion molecule1, ICAM1）结合发挥重要作用［1］。胶原诱导的关节炎因为在临床表现，免疫病理方面与风湿性关节炎极为相似，因此作为风湿性关节炎的动物模型得到了广泛的应用［2］。本研究通过观察LFA1基因敲除小鼠在胶原诱导关节炎中的发病率、放射线学以及组织学上的表现，探讨LFA1分子在关节炎发病中的作用，为类风湿性关节炎发病机制的探讨以及治疗方法的开发提供实验基础。 1材料及方法1.1动物 LFA1的a链CD11a基因敲除小鼠（日本理化学研究所生命研究中心）以及作为正常对照的C57BL/6小鼠均在无菌条件（specific pathogen free, SPF）下饲养。实验中全部应用7~9周龄的雌性小鼠。 1.2试剂 鸡胸骨来源的II型胶原（type II collagen, CII）(Sigma Chemical公司)，弗氏不完全佐剂(incomplete Freund’s adjuvant, IFA)（Sigma Chemical公司），热灭活的结核菌（M.tuberculosis H37Ra）(Difco Laboratories公司)。 1.3胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis, CIA) 将CII溶于10mmol/L的冰醋酸溶液中，浓度为2mg/ml，4℃旋转过夜。结核菌与不完全弗氏佐剂混合，制备结核菌终浓度为5mg/ml的弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant, CFA)。CII与弗氏完全佐剂等量充分混合，在小鼠尾根部位，分3点皮内注射，每只鼠注射100μl，即100μg的CII，21天后同样剂量，同样方法重复注射一次。 1.4关节炎评分 第二次加强免疫后进行关节炎评分。每周观察3次，至二次免疫后120天。根据肉眼所见的关节炎的严重症状进行临床评分。评分标准：0（正常）；1［一个指(趾)关节红肿］；2（两个或者更多关节红肿）；3（严重肿胀和/或关节强直）。每个肢体最高为3分，四肢合计最高评分为12分。 1.5组织学检查 加强免疫后第12日，分离小鼠膝、踝及趾关节，去除皮肤，肌肉组织，10%福尔马林磷酸盐缓冲液固定，EDTA脱钙3周，常规石蜡包埋。自动切片机切片，厚度为3μm，HE染色。 1.6放射线学检查 临床观察结束后，取小鼠关节，剔除皮肤及肌肉组织，进行软X线摄影，画像应用Photoshop 6.0软件进行处理。 2006, 26(2)王轶楠 等： LFA1基因敲除鼠胶原诱导风湿性关节炎发病率及程度的降低 中国生物工程杂志 China Biotechnology Vol.26 No.2 20