GB/T 19524.2-2004肥料中蛔虫卵死亡率的测定.pdf

ICS 65.080 B 10 荡黔 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T19524.2-2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 Determinationofmortalityofascaridegginfertilizers 2004-05-31发布 2004-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发 布 中 国 国家 标 准 化 管 理 委 员 会 GB/T19524.2-2004 oli 舀 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由农业部微生物肥料质量监督检验测试中心负责起草。 本标准主要起草人:姜听、李俊、沈德龙、曹凤明、李力。 GB/T19524.2-2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 1 范围 本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。 2 测定方法原理 将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔 虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。 3 仪器设备 往复式振荡器;天平;离心机;金属丝圈(约句.0cm);高尔特曼氏漏斗;微孔火棉胶滤膜(035mm, 孔径。.65K。一。.80tCm);抽滤瓶;真空泵;显微镜;恒温培养箱及其他试验室常用仪器、物品等。 4 试剂 本标准所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯。 a) 50.0g/L氢氧化钠溶液; b) 饱和硝酸钠溶液(密度 1.38-1.40); c) 500mL/L甘油溶液; d) 20mL-30mL/L甲醛溶液或甲醛生理盐水。 5 检验步骤 5 1 样 品处理 称取5.0g-10.0g样品(颗粒较大的样品应先进行研磨)，放于容量为50mL离心管中，注人氢氧 化钠溶液25mL^30mL，另加玻璃珠约 10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30min后，以 200r/min-300r/min频率振荡10min-15min。振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心 管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置 15min-30min后，振荡10min-15min, 5.2 离心沉淀 从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲 人管中，以2000r/min-2500r/min速度离心3min-5min后，弃去上清液。然后加适量蒸馏水，并 用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。 5.3 离心漂浮 往离心管中加人少量饱和硝酸钠溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和硝酸钠溶 液，随加随搅，直加到离管 口约 1cm为止，用饱和硝酸钠溶液冲洗玻璃棒，洗液并人离心管中，以 2000r/min-2500r/min速度离心3min-5min, 用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和 硝酸钠溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作3次~4次，直到液膜涂片在低倍显 微镜下观察不到蛔虫卵为止。 5.4 抽滤镜检 将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。若混合悬液的浑浊度大，可 更换滤膜。 GB/T19524.2-2004 抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于 低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。当观察有蛔虫卵时，将含有蛔虫卵的滤膜进行培养。 5.5 培养 在培养皿的底部平铺一层厚约 1cm的脱脂棉，脱脂棉上铺一张直径与培养皿相适的普通滤纸。为 防止霉菌和原生动物的繁殖，可加人甲醛溶液或甲醛生理盐水，以浸透滤纸和脱脂棉为宜。