生物化学经典实验酵母RNA提取与鉴定.pptVIP

酵母RNA的提取与鉴定 ;实验目的 ;实验原理 ;实验原理 ;稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。 浓盐法是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。;RNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。RNA在酸性条件下，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与地衣酚（3，5-二羟基甲苯）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氧化铜作催化剂。;本实验采用的稀碱，既可加速细胞的破裂，又可增大 RNA的溶解度。当碱被中和后，可用乙醇将RNA沉淀，此为 RNA的粗品。 样品中少量脱氧核糖核酸(DNA)存在对鉴定无干扰，蛋白质、粘多糖可干扰鉴定。;试剂的配制;实验步骤 ;2．RNA的鉴定 取沉淀约0.2 g，加2 ml 10％H2SO4→沸水浴中加热2 min???加1.5 ml地衣酚试剂→沸水浴中加热→观察颜色变化。;注意事项