细胞生物学.显微镜使用.pptVIP

细胞生物学实验 生命科学学院 项黎新、董伟仁688940） dongweiren@zju.edu.cn 油镜和测微尺的使用及细胞形态观察 叶绿体分离及荧光镜检（密度梯度离心法） 线粒体的分离及活性染色（差速离心法） 细胞化学（Feulgen反应） 细胞融合 小鼠染色体标本制作及观察 植物细胞骨架的制作及观察 自主实验 实验内容安排 实验报告（70%） 平时表现（30%） 考试成绩 课程特点与期望 没想象中简单 努力思考、多动脑 会分析、会设计、会解决 实验一 油镜和测微尺的使用 及细胞形态观察 一、实验目的 掌握油镜和测微尺的使用方法，学会用显微尺观察和测量细胞，并按比例绘制细胞大小示意图。 二、实验用品 器材：普通光学显微镜，台尺，目尺； 材料：兔脊神经节（示高尔基体），鼠肝（示线粒体）等 ； 试剂：香柏油，二甲苯 。 显微镜 组成： 光学系统：物镜、目镜和照明装置 机械装置：镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器和调焦装置等 物镜镜头： 40/0.70 (40物镜放大倍数；0.70镜口率) 160/0.17 (160镜筒长度；0.17盖玻片厚度) 显微镜使用原则 先低后高 先近后远 先粗后细 油镜的使用 先用低倍镜观察标本，把油镜下所要观察的移至视野中心，再换高倍镜观察（用细调调节器调节）。 旋离高倍镜，在标本上滴一滴香柏油，换油镜镜头，继续调节细调即可观察。 观察完毕后，旋离油镜镜头，下降载物台，先用干擦镜纸擦1～2次，把大部分的香柏油擦掉；再用二甲苯湿润的擦镜纸擦2～3次；最后用干擦镜纸擦1～2次。同样方法擦清标本。注意擦镜头时要顺镜头直径方向擦，不要沿着镜头的圆周擦。 三、实验原理（测微尺的使用） 测微尺由目尺和台尺组成。目尺是一块圆形玻璃片，上面刻有等距离的刻度，分成50～100格。实际刻度因不同物镜的放大倍数以及镜筒长度而不同，需要台尺校定。台尺则是一块特制的载玻片，中央封着一把刻度标尺，其每个刻度为0.01mm (10?m)。 link 每个大格又可分为10个小格，每小格的实际长度为0.01mm 总长0.1mm 镜台测微尺 总长1mm 共分为10格 四、实验步骤 用台尺标定目尺（10倍或40倍物镜）：将目尺装入目镜，有刻度面朝下。再将台尺固定在载物台上，小心移动台尺和转动目尺，使两尺最左边的直线愈合，然后由左向右找出两尺另一重合的直线。记录两次重合线间目尺和台尺的格数，按公式计算出目尺每格的长度（ ?m)： 台尺格数 目尺格数 取下台尺，换上标本观测。 ?10 ?m 目尺每格长度(?m)＝ 观察各种切片标本，注意细胞的形态结构、核的形态及数量。 用目尺测量细胞及核的大小（横距、宽距及厚度），每一类被测物测3个数据，最后取平均值。 按比例画出细胞大小的示意图。 思考题： 低倍镜的镜口率为什么不能过大？ 为什么光学显微镜的分辩率极限是0.2?m？ 擦镜头有几种方法？你认为哪种更合适？理由是什么？ 理想的用于擦镜头的试剂应具有哪些特点？