生物固氮15N2同位素示踪直接测定方法.pptxVIP

生物固氮的15N2同位素示踪直接测定方法; 用15N同位素测定生物固氮的方法可分为间接和直接两种方法，间接测定又包括15N富集同位素示踪法和用15N自然丰度变异法，该两种方法均需要参比作物或已知参比值以确定生物的固氮量，因此一般有很大的不确定性，固氮量的确定只能是半定量的；直接测定法是将联合固氮系统暴露在15N2气氛围中，通过直接测定15N吸收同化而确定其固氮的方法，这种方法是一种定量测定生物固氮的方法，但需要将固氮系统封闭在一个气密的固氮暴露箱内，操作比较复杂，另外标记同位素花费较高，因此长期以来在研究应用并不十分广泛，然而随着DNA或RNA探针技术的发展，直接固氮测定法在测定固氮和确定固氮微生物的基础研究方面将展示广阔的应用前景。; 1.15N2的制备、纯化和存储 15N2可由15N标记铵盐在碱性条件下和次溴酸盐反应制得，即 试剂 用Bremner法制备次溴酸盐一碘溶液。将400克NaOH溶解到60毫升水中，将此NaOH溶液的一半加入带有温度计并以碎冰冷却的一公升Ernlemeyer烧瓶中，将120毫升Br2缓慢地、逐滴地加入, 猛烈搅拌, 使温度保持在5 ℃ 以下，再加入另一半NaOH溶液，将此混合液搅拌几分钟，在冰箱中贮存一个星期之后, 将沉淀的NaBr结晶与上清液分开，用等体积的KI溶液（0.2%，w