再生障碍性贫血的免疫细胞治疗研究.docVIP

再生障碍性贫血的免疫细胞治疗研究 王 浩[1] 胡 凯[1] 陈嘉榆[2] 刘薇薇[2] 倪庆仁[1] 李罡灿[1] 杜明珠[1] 宋艳萍[1] 谢 佳[1] 王 漪[1] 张韵洁[1] 任婧婧[1] 谢永富[3] 蔡春风[3] 杨德懋[3] (1.西安市中心医院西安市血液病研究所,陕西西安 710003;2.广州市第十二医院，广东广州 510000；3.深圳中兴扬帆生物技术公司,广东深圳 518000) 摘要：目的 探讨免疫细胞治疗再障的安全性和有效性。方法 33例再障患者接受静脉输液注自体或供者提供经体外激活的免疫细胞(具体什么细胞？)，每周至少一次（1－2次／周）的症状，输血依赖、血象、骨髓像、骨髓活检、存活状态来评价疗效（不通！！）。结果 33例病人中，27例（82％）有效，其中完全缓解12例（36％），部分缓解15例（45％），无反应6例（18％）。3年的存活率为90％。结论 从治疗结果可以看出这种治疗是安全和有效的。 关键词：再生障碍性贫血；免疫细胞治疗 中图分类号：R556+.5 文献标示码：A 再生障碍性贫血是以贫血、出血、感染的临床表现和全血细胞减少、骨髓增生不良、骨髓活检显示造血组织细胞明显减少为特点的血液系统疾病[1]。本病的病因仍不是完全清楚，放射线暴露以某些有毒化学物品（例如苯）的影响作为致病原因已有报导[2]。本病经异基因造血干细胞移植治疗[3] [4]或者免疫抑制治疗[5] [6]已取得一定疗效。然而在国内由于没有HLA相合的供者或其他原因，大多数患者并不能进行异基因造血干细胞移植的治疗。女性患者还可能因移植对生殖腺体的损伤而不考虑接受移植治疗。有大约三分之二的病人接受了抗胸腺细胞球蛋白和／或环孢素A的免疫抑制治疗，但疾病的复发和继发的克隆性疾病仍有报导[7] [8]。最近一项回顾性分析 316例再障病人伴有低网织细胞和低淋巴细胞绝对计数者，对免疫抑制治疗有效，其5年存活率分别是41％和53％[9]。 再障的发病在亚洲比欧洲和北美洲高。欧洲的病人对免疫抑制治疗和骨髓移植治疗，从存活率、治疗反应和生活质量表现出一些不同的临床结果，而日本的研究显示对初始或后续的免疫抑制治疗的反应比欧洲和北美的低[10]。这可能反映了基因类型对疾病的发病及治疗反应的影响[11] [12] [13]。 我们采用体外激活周围血单个核细胞的治疗办法曾成功治疗了14例因苯中毒所致的再障患者取得成功。此研究在文章发表时病人都取得部分缓解，其后全部达到完全缓解[14]。在以化疗和放射线照射造成骨髓抑制小鼠模型中，此治疗显示从存活到骨髓恢复正常的有效性。此前动物实验及人体治疗显示自体和异基因的周围血治疗效果是相同的。本研究我们采用开放标记非双盲的试验以观察本治疗对再障病人的安全性和有效性。 1 资料与方法 1.1患者资料 本研究在西安市中心医院西安市血液病研究所和广州市第十二医院进行。所有患者均预先告知并签署知情同意书。所有患者的诊断及疗效判断均按张之南、沈悌主编的《血液病诊断及疗效标准》执行。患者经临床表现、血象、骨髓检查、骨髓活检诊断为再生障碍性贫血。自2001年1月至2009年12月，33例患者接受了这种治疗？？，患者平均年龄25岁（6－48岁），男女比例是1.2：1。从诊断到开展?此治疗的时间从1－10年（平均2年），19例患者此前接受过免疫抑制治疗(具体？)后失败。所有患者在诊断时均注意排除：骨髓增生异常综合征、细胞遗传学异常、范可尼贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿。 1.2 细胞和细胞培养 异基因周围血单个核细胞由非HLA配型的随机健康供者？？（不考虑GVHD的因素？也没有发生GVHD？似不可能）以细胞分离方式获得。自体细胞根据患者年龄由静脉采血20－50ml。再以淋巴细胞分离液将单个核细胞分离出来。细胞以大约4x106/ml数量，在含有IL-2（Ruixing Biopharmaceutical Inc,Beijing China）500IU/ml；GM-CSF（NCPC，石家庄）200U/ml，钙载体A23187（Sigma,st.louis.mo）100ng/ml中培养48小时，贴壁细胞仔细收获，少于5％的死亡细胞异常?。在输注前细胞经生理盐水洗涤3次后制成悬液，所有细胞的分离培养、洗涤均在空气层流实验室的超净工作台中的无菌状态下进行。细胞表型分析以流式细胞分析技术进行。 治疗与结果： 治疗经过：本研究开始时，5例重型再障患者按年龄接受（输注）体外活化的供者免疫细胞6x105-1x108每天输注1次连续4天。然后输注自体细胞每周3次。这样循环治疗直至患者中性粒细胞计数大于0.51x109/L，随后输注自体细胞每周一次。后来由于不能按需要得到供者的细胞，治疗方案改变为任选供者或自体的细胞输注每周1－2次