生物化学实验小牛肠碱性磷酸酶提纯及比活力测定.pptVIP

实验六  小牛肠碱性磷酸酶的提纯及比活力测定 实验目的 掌握小牛肠碱性磷酸酶的提取及酶活力测定的原理和方法 酶活力： 在最适反应条件（25℃）下，每分钟内催化1?mol底物转化为产物所需的酶量为一个酶活力单位，即1U=1?mol/min。 酶的比活力： 代表酶的纯度，用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示。 比活力=活力（U）/蛋白（mg）=总活力（U）/总蛋白（mg） 酶活力的测定方法： 分光光度法；荧光法；同位素测定法；电化学法 基本知识 蛋白质（酶）的分离纯化 根据蛋白分子之间特异性的差异，如分子大小，溶解度，电荷等。 性 质 方 法 分子大小 透析、超滤、密度梯度离心、凝胶过滤 溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀 电荷 电泳、离子交换层析 吸附性质 吸附层析（羟基磷灰石层析、疏水层析） 配体分子 亲和层析的生物亲和力 1、粗分级分离 主要是利用盐析法、等电点沉淀、有机溶剂沉淀等方法，使目的蛋白与其它较大量的杂蛋白分开，这些方法的特点是简便、处理量大、既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白质，但分辨率低。 （1）盐析 向蛋白质溶液中加入