微生物学通报环介导等温扩增技术快速检测施罗氏弧菌-微生物学报.PDF

微生物学通报 Sep. 20, 2018, 45(9): 1871−1880 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170999 研究报告 环介导等温扩增技术快速检测施罗氏弧菌(Vibrio shilonii) 杨艺滢1,2,4 陈偿1,2,3* 罗鹏1,2 丁雄祺1,2,4 谢媚1,2,4 (1. 中国科学院南海海洋研究所 中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室 广东 广州 510301) (2. 中国科学院南海海洋研究所 广东省应用海洋生物学重点实验室 广东 广州 510301) (3. 中国科学院南海海洋研究所 西沙、南沙深海海洋环境观测研究站 广东 广州 510301) (4. 中国科学院大学 北京 100049) 摘 要：【背景】近年来，珊瑚白化事件频有发生，面临着严重衰退。由气候变化引起的珊瑚病 原菌快速增殖是导致珊瑚白化的主要因素之一。施罗氏弧菌是枇杷珊瑚的致病菌，能侵入珊瑚虫 体内而使珊瑚白化死亡。【目的】优化并建立一种钙黄绿素显色法快速检测珊瑚致病菌施罗氏弧 菌的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplificaiton ，LAMP)检测技术。【方法】以枇杷 珊瑚致病菌施罗氏弧菌为研究对象，针对施罗氏弧菌的rpoD (RNA polymerase subunit D)基因 设计6 条特异性扩增引物，建立LAMP 检测体系并检测其特异性和灵敏度，同时对LAMP 法、 常规PCR 和荧光定量PCR 3 种检测方法进行比较分析。【结果】供检测的10 个样品菌株中， 施罗氏弧菌反应结果为阳性，呈亮绿色，其他 9 株包括阴性对照(灭菌水为模板)反应结果为阴 3 性，呈浅橙黄色；同时，所建立的钙黄绿素-LAMP 方法最低检测限度为3.641×10 cps/mL ， 具有与荧光定量PCR 等同的灵敏度和准确性，是常规PCR 最低检测限度的0.1%；此外，通 过模拟野外海水样品检测发现，钙黄绿素-LAMP 方法对海水样品中施罗氏弧菌的检测限度可 达 1.3×102 CFU/mL 。【结论】建立的钙黄绿素-LAMP 检测技术具有很好的特异性、灵敏度和 准确性，其操作方法简单、方便，无需昂贵仪器，适用于野外现场珊瑚致病菌施罗氏弧菌的 快速检测。 关键词：枇杷珊瑚，施罗氏弧菌，环介导等温扩增 Foundation item: Strategic Priority Research Program of the Chinese Academy of Sciences (XD *Corresponding author: Tel: 86-20 E-mail: chen.chang@ Received: November 26, 2017; Accepted: March 21, 2018; Published online () : March 22, 2018 基金项目：中国科学院战略性先导科技专项(A 类)资助(XD *通信作者：Tel ：86-20；E-mail ：chen.chang@ 收稿日期：2017-11-26 ；接受日期：2018-03-21 ；网络首发日期() ：2018-03-22 1872 微生物学通报