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药物筛选复习课 选择药物作用靶标的考虑因素 1? 靶标的有效性，即靶标与疾病确实相关，并且通过调节靶标的生理活性能有效地改善疾病症状。 2? 靶标的副作用，如果对靶标的生理活性的调节不可避免地产生严重的副作用，那么将其选作药物作用靶标是不合适的。 从天然资源中寻找微生物先导药的一般流程 1.采集各种来源的样品 2.根据不同的分离要求进行处理 3.对各类微生物分离纯化 4.分离菌株的培养、发酵 5.应用各种模型对发酵产品进行高通量筛选 6.对活性物质进行化学分离纯化及结构测定 7.活性物质体内外活性评价 8.先导化合物的结构优化及深入研发 9.放大发酵积累量进行临床研究 影响微生物合成的主要因素 影响其合成效率的主要因素有：所用微生物的种类、底物、酶、培养基类型、温度等。 （一）微生物 微生物种类不同，其代谢以及合成的产物的结构类型乃至生物活性多不相同，扩大微生物的来源是寻找新的微生物产物的有效途径之一 （二）酶及底物 由于生物合成酶的底物专一性较低，在其野生型菌株或阻断突变株的发酵过程中添加一些结构类似物可作为前体产生新的微生物产品 （三）其他培养条件 微生物体具有的合成能力在适宜其生长的条件下会增强，也会因改变培养基成分而随之 变化，当环境不利时则会抑制其合成。 微生物发酵法 发酵是利用未固定的微生物在发酵罐中生长来获得所需产品，能够进行批次性的生产； 发酵罐通常为含微生物营养基的大槽或大桶。发酵罐常配有能够调节培养基温度、pH和氧气含量的调节器； 典型的培养基含碳源如葡萄糖、水合淀粉或果糖； 蛋白质或氮源如大豆粉、玉米汤或棉籽粉； 维生素源如酵母提取物；矿物质和其他混合性营养物。 初级代谢与次级代谢 一般将微生物通过代谢活动所产生的自身繁殖所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢，该过程所产生的产物即为初级代谢产物，如氨基酸、核苷类，以及酶或辅酶等。 微生物的初级代谢是指微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动所需要的 物质和能量的过程。 次级代谢与初级代谢关系密切，次级代谢是指微生物在一定的生长时期，以初级代谢的关键性中间产物为前体物质，合成一些对微生物的生命活动无明确功能的物质的过程，这一过程的产物，即为次级代谢产物。 次级代谢产物在微生物生命活动过程中的产生极其微量，对微生物本身的生命活动没有明显作用，当次级代谢途径被阻断时，菌体生长繁殖仍不会受到影响。 微生物固定法 细胞固定就是将微生物种在一个不溶的细胞性或非细胞性模块上，模块可以是合成的聚合物、生物聚合物或微生物体本身。 微生物固定有 种常用的方法，包括在模块中诱导、模块上吸附、压缩入模块、与模块以共价键结合、细胞间的化学交叉结合以及絮凝，最常用的是诱导。 基因突变的种类 根据遗传信息的改变方式，可分为同义突变、错义突变和无义突变三种。 同义突变：改变后的密码子和改变前的密码子是简并密码子，它们编码同一种氨基酸，这种基因突变称为同义突变 错义突变：由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变为决定另一种氨基酸的密码子的基因突变叫错义突变。这种基因突变有可能使它所编码的蛋白质部分或完全失活 无义突变：由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密码子的基因突变叫无义突变。其中密码子改变为UAG的无义突变又叫琥珀突变，密码子改变成UAA的无义突变又叫赭石突变 基因突变的特点 1、基因突变在生物界中是普遍存在的 2、基因突变是随机发生的。它可以发生在生物个体发育的任何时期和生物体的任何细胞 3、在自然状态下，对一种生物来说，基因突变的频率是很低的 4、大多数基因突变对生物体是有害的 5、基因突变是不定向的。一个基因可以向不同的方向发生突变，产生一个以上的等位基因 基因突变与药物靶标的发现及应用 在基因水平上寻找药物靶标过程： 1? 寻找疾病相关生物分子线索：利用基因突变技术获取疾病相关的生物分子信息，并进行生物信息学分析，获取线索。 2? 对相关的生物分子进行功能研究，以确定候选药物作用靶标。 3? 候选药物作用靶标，设计基因突变的DNA及其多肽在分子、细胞和整体动物水平上进行药理学研究。 4? 验证靶标的有效性。 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其基本原理是:细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行SDS及Western blotting分析。 特点 优点： （1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； （2）蛋白的相互作用是