鄄氮杂鄄忆鄄脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体.pdf

CN43鄄1262/ R摇 中国动脉硬化杂志2014年第22卷第11期 1081 [文章编号]摇 1007鄄3949(2014)22鄄11鄄1081鄄06 ·实验研究 · 5鄄氮杂鄄2忆鄄脱氧胞苷通过上调法尼酯 X受体启动子甲基化 水平抑制 HepG2细胞载脂蛋白A表达 1,2 1,2 1 1 1 1 1 马小峰 ,谭剑凯 ,张海 ,何兴兰 ,瞿 凯 ,雷建军 ,王佐 (1.南华大学心血管疾病研究所 动脉硬化学湖南省重点实验室,湖南省衡阳市421001; 2.南华大学附属南华医院心内科,湖南省衡阳市421002) [关键词]摇 载脂蛋白A;摇 脂蛋白(a);摇 5鄄氮杂鄄2忆鄄脱氧胞苷;摇 DNA 甲基化;摇 法尼酯X 受体 [摘摇 要]摇 目的摇 探索5鄄氮杂鄄2忆鄄脱氧胞苷(5鄄Aza鄄CdR)的DNA去甲基化作用对HepG2 细胞载脂蛋白A(ApoA) 表达的影响,并探讨其作用机制。 方法摇 选取ApoA 高表达细胞株HepG2 细胞为研究对象。 噻唑蓝法测定HepG2 经不同浓度(0、10、20、40、80 滋mol/ L)的5鄄Aza鄄CdR处理不同时间(12、24、48、72、96 h)后细胞相对存活率;Western blot检测5鄄Aza鄄CdR不同浓度组HepG2 细胞ApoA、法尼酯X 受体(FXR)的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测 ApoA、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5鄄Aza鄄CR不同浓度组的甲基化水平。 结 果摇 与对照组相比,5鄄Aza鄄CR 10、20、40 滋mol/ L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异(P 0郾05), 而在20 滋mol/ L 96 h 组、40 滋mol/ L 96 h 组、80 滋mol/ L 24 h 组、80 滋mol/ L 48 h 组、80 滋mol/ L 72 h 组以及 80 滋mol/ L96 h组HepG2 细胞存活率存在统计学差异(P0郾05),选取0~40 滋mol/ L为5鄄Aza鄄CdR的安全浓度范围, 0~72 h为合适作用时间。 与对照组相比,5鄄Aza鄄CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调ApoA蛋白表达,其 中以40 滋mol/ L组最为明显(P0郾05);与对照组相比,5鄄Aza鄄CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调ApoA mR鄄 NA表达,其中以40 滋mol/ L组最为明显(P0郾05)。 随着5鄄Aza鄄CdR 浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈 下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58郾3%,而40 滋mol/ L组FXR基因启动子甲基化率仅为8郾3%。 结论摇 5鄄Aza鄄CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调ApoA 的表达。 [中图分类号]摇 R363 [文献标识码]摇 A 5鄄Aza鄄2忆鄄Deoxycytidine Inhibits HepG2 Cells Apolipoprotein A Expression via In鄄 creasing Farnesoid X Receptor Promoter Methylation 1,2 1,2 1 1 1 1 1 MA Xiao鄄Feng ,TANJian鄄Kai ,ZHANG Hai ,HE Xing鄄Lan ,QU Kai ,LEIJian鄄Jun ,and WANGZuo (1.Research Institute of Cardi