生化chapter0307aminoacidsandprotei到ns4.pptVIP

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  • 2019-01-05 发布于福建
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生化chapter0307aminoacidsandprotei到ns4

常用的凝胶: 葡聚糖凝胶 琼脂凝胶与琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 分级沉淀(盐或有机溶剂) 4.3 根据蛋白质溶解度大小建立的分离纯化方法 工艺流程说明: 1.发酵液预处理 2.压滤 3.浓缩 4.沉淀 5.压滤 6.干燥 4.4 根据蛋白质电荷差异建立的分离纯化方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 平板电泳 等电聚焦电泳 4.5 根据蛋白质吸附特性建立的分离纯化方法 4.6 根据蛋白质特异亲和 力建立的分离纯化方法 凯氏定氮法 紫外吸收法 双缩脲法 Folin-酚法(Lowry法,蛋白质在碱性溶液中与铜形成复合物,此复合物及芳香族氨基酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂产生蓝色。 ) Bradford法(考马斯亮蓝染料结合法) BCA法(bisinchoninic acid method) 4.7 蛋白质含量测定的常用方法 4.7.1.凯氏定氮法 原理:氮在蛋白质分子中含量恒定(平均占16%),因此测出样品中氮的含量后,即可求得样品中蛋白质含量。 每克样品中含氮的克数×6.25×100=100克样品中蛋白质的含量(克%)。 将蛋白质样品用浓H2SO4 消化分解(加热、常加少量的硫酸铜、硫酸钾作催化剂),使其中的氮转变为铵盐,碳转变为CO2,硫转变为SO2、SO3等逸出。铵盐再与浓碱反应,放出的氨被酸(硼酸)吸收,滴定剩余的酸,算出氮的含量。 4.7

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