采用自克隆技术构建高SOD低双乙酰的啤酒酵母工程菌-食品科学.PDF

248 2009, Vol. 30, No. 19 食品科学 ※生物工程 采用自克隆技术构建高SOD、低双乙酰的 啤酒酵母工程菌 1 1 2 2 1, 母 茜 ，蔡 勇 ，王肇悦 ，张博润 ，任正隆 * ( 1.四川农业大学植物遗传育种省级重点实验室，四川雅安 6250 14 ； 2.中国科学院微生物研究所酵母遗传育种实验室，北京 100 10 1) 摘 要：用来源于啤酒酵母自身的超氧化物歧化酶基因SOD 1、铜抗性基因CUP 1、3- 磷酸甘油酸激酶基因P GK 1 启动子和α-f actor 基因取代α- 乙酰乳酸合成酶基因IL V2 内部约1.1kb 的片段，得到重组质粒pMC572 ，采用同源重 组的方法将用内切酶酶切质粒pMC572 得到的含有SOD 1、CUP 1、P GK 1 和α-f actor 以及IL V2 两端序列的片段转化 啤酒酵母工业菌株YSF3 1，并通过铜抗性、PCR 和AHAS 酶活测定筛选得到转化子。结果表明啤酒酵母工程菌胞 内的SOD 能够分泌到胞外，乙偶姻的含量也只有受体菌的50% ，而其他发酵指标并没有发生变化。 关键词：啤酒酵母；超氧化物歧化酶；乙偶姻；自克隆 Construction of Industrial Brewing Yeast with High-SOD and Low-diacetyl Productivity Using Self-cloning Technique 1 1 2 2 1, MU Qian ，CAI Yon g ，WANG Zhao-yu e ，ZHANG Bo-run ，REN Zh eng-lon g * (1. State Key Laboratory of Plant Breeding and Genetics, Sichuan Agricultural University , Yaan 6250 14, China；2. Laboratory of Molecular Genetics and Breeding of Yeast, Institute of Microbiology of Chinese Academy of Sciences, Beij ing 100 10 1, China) Abstract ：A recombinant plasmid pMC572 was con structed through replacing internal fragment of α-acetohydroxyacid synthase (AHAS) gene (IL V2) with a fused gene that contained a copper resistant gene (CUP1),PGK1 promoter, α-factor sequence and open reading frame of SOD gene from Saccharomy ces cerevisiae. An industrial brewing yeast strain, YSF3 1, was transformed with plasmid pMC572. The self-cloning strains were selected in terms of resistance ability to CuSO4 , PCR amplification assay and AHA S activity