广藿香原生质体制备培养与融合技术优化研究-广西植物.PDF

－ 　 Ｇｕｉｈａｉａ － ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ 　 Ｏｃｔ.２０１８ꎬ３８(１０):１３１０ １３１８ ＤＯＩ:１０.１１９３１/ ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１７１１０２７ － 引文格式:严寒静ꎬ李磊ꎬ张宏意ꎬ等.广藿香原生质体制备、培养与融合技术优化研究 [Ｊ].广西植物ꎬ２０１８ꎬ３８(１０):１３１０ １３１８ ＹＡＮ ＨＪꎬＬＩ ＬꎬＺＨＡＮＧ ＨＹꎬｅｔ ａｌ. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎꎬｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ｉｎ Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎ ｃａｂｌｉｎ [Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０１８ꎬ － ３８(１０):１３１０ １３１８ 广藿香原生质体制备、培养与融合技术优化研究 １ꎬ２ １ １ꎬ２ １ꎬ２∗ 严寒静 ꎬ李　 磊 ꎬ张宏意 ꎬ何梦玲 ( １. 广东药科大学 中药学院ꎬ广州 ５１０００６ꎻ２. 国家中医药管理局 岭南药材生产与开发重点研究室ꎬ广州 ５１０００６ ) 摘　 要:为建立高效稳定的广藿香原生质体培养与融合技术体系ꎬ该研究以广藿香愈伤组织悬浮细胞为材 料ꎬ研究了原生质体制备的酶解条件和培养方法、细胞密度、激素种类和浓度等因素对原生质体培养的影 响ꎬ并通过测定融合产物直径确立融合细胞筛选范围ꎬ进一步研究聚乙二醇浓度、细胞密度、融合时间及融 合液加入量等因素对原生质体融合的影响ꎮ 结果表明:制备原生质体的适宜条件为ｐＨ５.８ꎬ酶解温度２５ ℃ꎻ ￣１ ￣１ 原生质体培养以铵盐减半的ＭＳ 培养基进行海藻酸钠包埋、激素选用０.２ ｍｇ Ｌ ＮＡＡ、２.０ ｍｇ Ｌ ６￣ＢＡꎬ培 １ ５ ￣１ ￣１ × 养密度２.０ １０ 个 ｍＬ 、蔗糖添加量 １.０％、酸水解酪蛋白５００ ｍｇ Ｌ 的条件下原生质体分裂频率、植板率 均较高ꎬ且开始分裂时间和细胞团形成时间都较短ꎻ双细胞融合产物筛选范围为６９.３３~８７.３５ μｍꎻ以４０％ ５ ￣１ × ＰＥＧ６０００化学促融３０ ｍｉｎ、加入０.５倍体积的融合液、细胞密度２.０ １０ 个 ｍＬ 的条件进行原生质体融 合ꎬ聚合率可达５７.１９％ꎻ获得的融合产物经海藻酸钠包埋培育２个月后可观察到再生愈伤组织ꎮ 关键词:广藿香ꎬ聚乙二醇ꎬ原生质体制备ꎬ原生质体融合ꎬ新品种选育 中图分类号:Ｑ９４５　 　 文献标识码:Ａ　 　 文章编号:１０００￣３１４２(２０１８)１０￣１３１０￣０９ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎꎬｃｕｌｔｕｒｅ