试验上皮组织.DOC

实验一、上皮组织 一、实验目的： ⒈? 了解组织学实验目的，内容和实习规则。 ⒉? 通过复习显微镜的构造和使用规则，进一步正确掌握显微镜的使用。 ⒊? 参观组织切片的制作,了解一般石蜡切片制作过程,以及苏木素—伊红(HE)染色法的过程。 4.? 通过看电视录像掌握上皮组织的分类，各类上皮的特点及分布。在此基础上总结出上皮组织的一般特征；熟悉上皮组织的特殊结构。 二、实验内容： （一）显微镜的构造及使用规则 １．显微镜的构造 ２．显微镜的使用规则： （1）拿显微镜时，必须一手握住镜臂，另一只手托住镜座，避免脱落。 （2）使用前的检查和准备，用前必须检查零件有无缺损，粗细螺旋是否松紧适宜，镜头有无污物，推进器是否灵活，发现问题及时报告，以免影响学习。 （3）对光;将显微镜放置座位左侧，打开光圈，上升聚光器，转动转换器使低倍（10×）接物镜正对下方。从侧方目视，调粗螺旋，上升载物台使其与物镜相距约0.5cm，然后移左眼到接目镜（双眼自然睁开），使光线反射入聚光器，达整个视野最明亮。 （4）放置标本低倍镜观察：认出切片正反面，将正面（有盖玻片的一面）朝上放于载物台上用片夹固定好，使用推进器使有组织的部分对准接物镜中心。左眼回到接目镜，调粗螺旋使载物台下降，动作缓慢，仔细观察直至视野中出现清晰物像为止。利用推进器前后左右推动标本以全面观察组织器官的一般结构。 （5） 转换高倍镜（或油镜）：对某个需详细观察其结构的部分须在低倍镜下找到并调清晰后，移至视野中心，转换高倍镜头，调节细螺旋至清晰物象（切记禁用粗螺旋)。需用油镜观察时，必须在低、高倍镜调清楚后，将高倍物镜转离，加一滴镜油于玻片上，再将油镜头转正，细心地调细螺旋至物象清晰即可。 （6） 用完后处理：转动转换器，取走切片（用油镜后，必须用二甲苯擦净镜头及切片）， （二）组织切片的制作 为了在显微镜下能够看到组织的微细结构，必须把组织切成很薄的薄片，并染色，为此，须将组织器官进行以下处理： 1、取材固定，将新鲜动物或尸体的组织器官切下一小块，通常置于10%福尔马林液中固定，以保持原来的结构，一般固定24～40小时。 2、脱水，透明：用不同浓度的酒精。按70%→80%→90%→95%→100%的顺序脱出组织器官中的水份，然后用二甲苯透明。 3、浸蜡、包埋: 透明后的组织器官，投入60℃的溶蜡中浸透，使石蜡完全地透入组织器官内部。然后用包埋器将浸透石蜡的组织器官包于石蜡中，即组织内、外全部由石蜡充满和包裹，使组织器官变硬，利于切成薄片。 4、切片、粘片：将上述蜡块用切片机切成3～10微米薄片，置温水展开，贴于涂有蛋清甘油的载玻片上，放入37℃温箱烘干。 5、脱蜡、染色: 将上述载有蜡片的玻片放入二甲苯中，至蜡全部溶解后经100%→95%→90%→80%→70%不同浓度的酒精脱去二甲苯，并由水取代酒精，再染色，最常用的是苏木精（Hematoxylin）和伊红（Eosin）染色，简称HE染色。 6、脱水、封固：又经70%→80%→90%→95%→100%不同浓度的酒精,? 脱去染色过程中的水份, 再经二甲苯透明加上树胶, 盖上盖玻片，宜于长期保存和观察。 将染色后的切片标本，置于显微镜下，观察是否符合染色标准。 （三）染色结果：细胞核被苏木精染成紫蓝色，细胞质及胶原纤维被伊红染成粉红色。 （四）上皮组织??????? １．单层扁平上皮?? 片号：EP1?? 取材： 蛙肠系膜??? 染色：镀银法 ?低倍镜：示单层扁平上皮的表面观。可见切片中有许多细的黑线条纹, 此即细胞界线。 ?高倍镜：细胞呈不规则的多边形，互相毗连。胞核不见或不清楚。 ２．单层立方上皮??? 片号：E1? 取材：狗甲状腺???? 染色：HE 低倍镜：可见许多大小不等的囊泡即甲状腺滤泡。滤泡中充满着红色的胶状物，均匀一片。滤泡的壁是单层立方上皮。 高倍镜：详细观察滤泡壁的细胞，上皮细胞紧密排列成单层，胞体呈立方形，（即细胞高度与宽度约相等）。胞核圆形，紫蓝色，位中央。胞质粉红色。 ３．单层柱状上皮?? 片号：D2??? 取材：狗小肠???? 染色：HE 低倍镜：小肠腔面有许多指状突起为小肠绒毛，绒毛表面即是小肠的单层柱状上皮。绒毛断面不一，有的是与肠壁脱离的横切面、斜切面，有的是完整的纵切面。务必选择切面较规整、排列整齐的部位观察。 ??高倍镜： ①柱状细胞：量最多，呈柱状（即细胞高度大于宽度），细胞界线不清，胞核椭圆形稍偏于基部，核长轴与胞体长轴平行，胞质粉红色，游离面可见一条深染的、折光率较强的窄带——纹状缘（电镜下应该是什么结构？） ②杯状细胞：位于柱状细胞之间，散在分布。其顶部圆形较大，底部较细窄，形似高脚酒杯状，顶部的圆形部分被染成空泡状，该空泡是因为杯状细胞