赭曲霉甾体11α–羟化酶基因AOH在毕赤酵母中的-天津科技大学学报.PDF

第 32 卷 第 5 期 天津科技大学学报 Vol. 32 No. 5 2017 年 10 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Oct. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 赭曲霉甾体 11α–羟化酶基因 AOH 在毕赤酵母中的 表达及功能分析 郭 凯，曹 通，黄琳琳，刘晓光，王正祥，路福平 (工业发酵微生物教育部重点实验室，工业酶国家工程实验室，天津市工业微生物重点实验室， 天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘 要 ：11α– 羟基左旋乙基甾烯双酮 (11α-OH-GD)是生产高效避孕药去氧孕烯的关键中间体 丝状真菌赭曲霉 (Aspergillus ochraceus )TCCC41060 可以转化左旋乙基甾烯双酮 (GD)形成 11α-OH-GD ，但该转化反应特异性低 ，副产 物偏高 ，限制了其工业应用 为了研究赭曲霉转化 GD 特异性偏低的机理 ，本文克隆了赭曲霉 11α–羟化酶基因 AOH 并构建了表达载体 pPIC3.5,K-AOH ，获得了重组毕赤酵母菌株 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)与免疫印迹实验 4 ，与预测结果一致 对转化产物进行薄层色谱 (TLC) (Western blot)分析表明 ，AOH 重组蛋白相对分子质量为 6.12 ×10 和高效液相色谱 (HPLC)分析结果显示 ，AOH 重组菌株能够转化 GD ，形成目标产物 11α-OH-GD 以及 3 种副产物 以 上结果表明 ：AOH 基因编码的甾体 11α–羟化酶对底物 GD 转化反应的特异性较差 关键词 ：赭曲霉；11α–左旋乙基甾烯双酮；毕赤酵母 中图分类号：Q786 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-6510 (2017)05-0034-05 Expression and Function of Steroid 11α-Hydroxylase Gene AOH from Aspergillus ochraceus in Pichia pastoris GUO Kai ，CAO Tong ，HUANG Linlin ，LIU Xiaoguang ，WANG Zhengxiang ，LU Fuping (Key Laboratory of Industrial Fermentatio