人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖许茹-Cusabio.PDF

网络出版时间：2011-7-1 15:55 网络出版地址：/kcms/detail/44.1627.r1555.001.html 人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖 许 茹，夏文杰，戎 霞，叶 欣，邵 媛，王 敏，罗广平，付涌水 广州血液中心输血研究所，广东 广州 510095 摘要：目的 探讨人血小板裂解液 （human platelet lysates ，HPL ）对骨髓间质干细胞 （Mesenchymal stem cells, MSCs ）增殖以及生物学特性的影响。方法 通过对机采血小板反 复冻融获得HPL，采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs ，分别用10%胎牛血清（feotal calf serum, FCS ）和LD-DMEM 添加不同浓度的HPL 进行培养, 以确定最佳HPL 浓度。分离6 株人源MSCs,从原代开始分别用添加胎牛血清和最佳HPL 浓度的LD-DMEM 进行培养，对 两种培养体系下6 株不同来源的MSCs 的增殖能力，表面标记表达量以及细胞周期进行研 究，并利用t-test 进行统计学分析，P0.05 视为有统计学差异。结 研究发现HPL 中含有 MSCs 生长所必需的4 种生长因子，PDGF-AB （人血小板衍生生长因子AB ）， bFGF （成 纤维细胞生长因子），IGF- 1 （胰岛素样生长因子 1） ,TGF-β1 （转化生长因子β1 ）, 浓度分 别为：（0.53 ± 0.06 ）ng/mL ，（37.5± 4.31）pg/mL ，（0.15 ± 0.06 ）mg/mL，（5150± 463 ）pg/mL 。 适合MSCs 增殖的最佳HPL 浓度为7.5% 。两种培养条件下的细胞形态无明显区别，均为 长梭形。8 代以前，细胞增殖能力没有显著性差异 （P0.05 ）,两种培养条件下的MSCs 均表 达CD105，CD106 以及粘附分子CD29 和 CD44，不表达CD34，CD45,且其表达量没有显 著性差异 （P0.05 ）。两种培养体系下绝大多数细胞处于G0-G1 期，FCS 培养的MSCs 其 G0-G1 期占 （96.97±0.95）%，7.5%的HPL 培养的MSCs 其G0-G1 期占 （94.58±1.56 ）%， 两种培养条件下不同周期没有显著性差异 （P0.05 ）。结论 本研究适合MSCs 增殖的最佳 HPL 浓度为7.5%，HPL 可以替代胎牛血清体外培养扩增人骨髓间质干细胞，并保持其生物 学特性基本不变。 关键词：骨髓间质干细胞；血小板裂解液；增殖；表面标记；细胞周期 中图分类号：R551 文献标志码：A 文章编号： Human platelet lysates promotes the proliferation of mesenchymal stem cells in vitro XU Ru, XIA Wen-jie, RONG Xia, YE Xin, SHAO Yuan, Wang Min, LUO Guang-ping, FU Yong-shui Institute of Blood Transfusion, Guang