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基本实验技术 陈妍 2012-12-17 内容提要 一、基本实验技术和方法 细胞培养 MTT 划痕修复 western blot siRNA 二、如何把实验做好（心得体会） 一、基本实验技术和方法 （一）细胞培养 1 培养细胞的特性 培养细胞的生长方式 贴附生长：贴附于支持物表面 悬浮生长：于悬浮状态下即可生长 游离期 贴壁期 培养细胞生长的条件 1 细胞的营养需要（血清质量好坏是实验成败的关键） 2 细胞的生存环境 温度: 37 ℃ O2 20% CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- pH: 7.2-7.4 渗透压 3 无污染 4 无毒 2. 四唑盐（MTT）比色法 原理： （1）活细胞 线粒体 脱氢酶 （2）可溶性的四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。 预实验 OD:0.8—1.2 有效值 （线性范围） 吸光度与所含的formazan量成正比 细胞点板量的确定（保证所测的con值在0.8-1.2 之间） 不同的细胞株不同 不同的时间点不同 细胞计数 操作步骤 （1）单细胞悬液接种于96孔培养板；8000个细胞/孔，每孔培养基总量200微升（100+100