共固定化乳酸茵根霉及酵母互生体系的生态学-上海师范大学学报.PDF

维普资讯 第32卷第 3期 上海师范大学学报(自然科学版) Vo1．32．No．3 2003年 9月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) Sep ．20 03 共固定化乳酸茵、根霉及酵母 互生体系的生态学效应分析 陈 军，沈 建，夏志华，许宝孝 (上海师范大学 生命与环境科学学院，上海 200234) 摘 要：应用共固定化技术建立乳酸茵L3，根霉R2和酵母 Y5三茵之间的互生发酵体系．通 过对固定化载体微环境的生态学特性分析，结果表明：乳酸茵，根霉和酵母细胞分别以l：2：l 的初始细胞比例组成的共固定化细胞体系，在亚适量供氧条件下最有利于形成生态分布协调 的多茵群体体系． 关键词：共固定化细胞；协同发酵性能；生态学分布 中图分类号：TS262．3 文献标识码 ：A 文章编号：1000-5137(2003)03-0068-07 乳酸菌、根霉和酵母是传统混合酿造体系中的重要组成微生物．由于各 自生长代谢所需生态环境以 及所进行的生化反应过程各不相同，因而各菌在多菌种发酵体系中所起的作用也各不相同．但在传统的 游离细胞的多菌混合培养状态下，各菌所处的生境是均同的，这就很难保持各菌之间最适宜的代谢平衡 关系，难 以发挥菌体 自身的发酵潜力，因而在传统发酵过程中发酵条件的控制相当复杂．这也是造成传 统发酵效率低、周期长、产品品质不稳定的一个主要原因． 以往的研究表明在发酵过程中通过乳酸菌、根霉和酵母等多菌种之间形成协调的生境更有利于促 进糖化、醇化等一系列复杂生化过程的进行 J．本文在研究共固定化乳酸菌、根霉和酵母的发酵性能 的基础上，进一步从多菌生长的生态效应上研究共固定化细胞协同性发酵的机理，以进一步揭示共固定 化细胞的生理代谢特征． 1 材料及方法 1．1 菌种 乳酸杆菌L3，根霉R2，酵母菌Y5．以上菌种均为本室从小曲中分离、筛选． 1．2 培养基 增殖培养基 ：牛肉膏0．5％，酵母膏0．5％，蛋 白胨 1％，葡萄糖 l％，乳糖0．5％，NaCL0．5％，pH6． 8，0．1MPa，20min； 发酵培养基 ：淀粉 l％ 一5％，黄豆粉 1．5％，磷酸二氢钾 0．05％，硫酸镁 0．025％，0．1MPa灭菌 20min，pH 自然． 收稿 日期 ：2002一II-II 基金项 目：上海市高校科技发展基金资助项 目(项 目编号97D16) 作者简介：陈军(1966一)，男，上海师范大学生命与环境科学学院副教授 维普资讯 第 3期 陈 军，沈 建，夏志华。等：共固定化乳酸菌、根霉及酵母互生体系的生态学效应分析 69 1．3 固定化材料 海藻酸钠 ，卡拉胶 ，氯化钙 ，氯化钾等． 1．4 共固定化方法 (1)固定化细胞的活化：乳酸杆菌 3【接种到液体增殖培养基中30~C静置培养24h；根霉R2接种到 PDA平板上，30~C培养2—4d；酵母菌Y5接种到液体增殖培养基中30~C，120r／m振荡培养48h． (2)标准菌悬液的制备：乳酸杆菌 3【增殖培养液4~C，4000r／m，离心20min；取菌体细胞沉淀，加无 菌水调制成含菌 1O 一10m／mL菌悬液；无菌水洗涤平板上的根霉 R2孢子，调整孢子浓度为 1O 一1O。／ mL；酵母菌Y5培养液4~C，4000r／m，离心 15min；取菌体细胞沉淀，加无菌水调制成含菌 1O 一10／mL 菌悬液． (3)共固定化：无菌条件下分别按不同的比例取各种不同的菌悬液混合，取混合菌悬液20mL加到 50mL2．5％海藻酸钠卡拉胶混合溶液中混合均匀，用恒流泵将含菌混合液滴入 5％CaC1：，0．5％KC1溶 液中制成共固定化凝胶颗粒．固化4h后用无菌水冲洗备用．颗粒直径为4—5mm． (4)共固定化颗粒的增殖：每 10g共固定化颗粒加入70mL增殖培养基 ，于 250mL三角瓶