乳腺癌HER2基因FISH检测经验分享.PDF

乳腺癌HER2基因FISH检测经验分享 郑州大学第一附属医院病理科 张岚 主要内容 • 荧光原位杂交检测的原理 • 乳腺癌HER2基因FISH检测操作步骤 • 乳腺癌HER2基因FISH实验操作经验交流 荧光原位杂交检测的原理 荧光原位杂交检测的原理 • 用荧光素标记的DNA探针，利用探针与被测样本DNA碱基 对的互补性，在探针与样本的DNA杂交后，通过荧光显 微镜观察荧光信号 乳腺癌HER2基因FISH检测 操作步骤 乳腺癌HER2基因FISH检测操作流程简图 组织固定 组织固定 组组织织固固定定 及制片 及制片 及及制制片片 组织切片 组织切片 组组织织切切片片 的预处理 的预处理 的的预预处处理理 变性杂交 变性杂交 变变性性杂杂交交 洗涤复染 洗涤复染 洗洗涤涤复复染染 乳腺癌HER2基因FISH检测操作流程简图 组织固定 • 组织固定 组织固定 组组织织固固定定 及制片 • 脱水浸蜡包埋 及制片 及及制制片片 • 切片 组织切片 • 切片脱蜡水化 组织切片 组组织织切切片片 的预处理 • 酶消化前的预处理 的预处理 的的预预处处理理 • 酶消化 • 变性 变性杂交 变性杂交 变变性性杂杂交交 • 杂交 • 切片洗涤 洗涤复染 洗涤复染 洗洗涤涤复复染染 • DAPI复染 操作步骤一、组织固定及制片 • 使用10%中性缓冲福尔马林固定组织 • 固定时间为6～72小时 • 组织的脱水、浸蜡、透明、包埋 • 石蜡包埋的组织切取3µm切片 • O 65 C烘烤过夜 操作步骤二、组织切片的预处理 • 二甲苯室温脱蜡2次，每次10分钟 • 室温置于100%酒精中2次，每次5分钟 • 梯度酒精复水 • O 90 C去离子水处理切片30分钟 • 2×SSC漂洗两次，每次3分钟 • 将组织切片置于200µg/ml蛋白酶K消化液中消化5-20分钟 • 2×SSC漂洗两次