家蚕杆状病毒表达的说hgm四-csf的纯化及糖基化分析.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 hGM．CSF是一种重要的造血调控因子，能诱导粒细胞前体和巨噬细胞前体 细胞呈集落性生长，在促进粒细胞恢复方面疗效显著，具有重要的临床应用价 值。由于糖基化程度和派生细胞类型的不同，重组细胞能产生多种形式、大小 不同的hGM．CSF，其分子量变化从16．50 kDa。糖基化可影响hGM．CSF的药代 动力学性质，抗原性和毒性，对于延长血清半衰期有很重要的作用，糖基化程 度高的动物细胞源的rhGM—CSF在体内稳定性方面优于酵母和大肠杆菌源的， 因此纯化家蚕杆状病毒表达的hGM．CSF以及分析其糖基化有一定的研究意义。 本研究首先对接种hGM—CSF的蚕蛹粉进行了Western blot鉴定，在PVDF 膜上能杂交到特异性条带，通过夹心法ELISA检测到蚕蛹粉中hGM．CSF蛋白 的含量为2％o左右。而后开展了小规模纯化预实验，蚕蛹粉中含有大量的杂质及 油脂，因此采用高速离心、硫酸铵分级沉淀和超滤对蚕蛹粉进行粗纯化，通过 Resource Q阴离子交换色谱能使目的蛋白得到富集，进行免疫共沉淀进一步纯化 目的蛋白，得到了微量较纯的hGM．CSF。家蚕杆状病毒表达的hGM．CSF不带 His、GST等标签，只能采用离子交换色谱、亲和层析、分子排阻色谱等方法来 达到纯化的目的，而采用亲和层析方法进行大规模纯化需要大量的抗体，因此 在进行小规模纯化实验的同时，免疫新西