有机混合物瘤的分离-色谱法.pptVIP

返回 填充柱和毛细管柱 填充柱：气固色谱（常用固体吸附剂），气液色谱（常用固定液，担体） 毛细管柱：内径0.25~0.5mm,长25~50m 新型固定相：高分子多孔微球，球形多孔硅胶，键合固定相 返回 返回 返回 返回 气相色谱的基本参数与计算公式 保留时间tR与死时间t0 组分从进样到出现峰最大值所需时间为保留时间，不被固定相滞留部分从进样到出峰最大值的时间 容量因子k’ 在平衡状态时，组分在固定相与流动相中的浓度之比 选择性因子α 两组分分离程度的量度 理论塔板数N 组分从进样到出峰，经过无数次分配平衡，每一次平衡完成过程中，组分随流动相移动的距离 分离度 分离柱对混合组分的分离情况 返回 返回 流动相流速对柱效的影响——范帝姆脱方程（Van Deemter equation） H为理论塔板高度，v为流速。 Ａ为分子涡流扩散项，第二项为组分分子（纵向）扩散项 第三项为传质阻力项。 返回 定性分析 利用保留值定性：相对保留值，保留值与碳数变化规律，多柱定性，不同柱温定性 应用化学反应定性：制备衍生物，扣除法，官能团特征反应 与其他检测仪器联用定性：与质谱，红外光谱，等仪器联用 定量分析 返回 定量分析 峰面积定量：自动积分，面积仪，剪纸称重，　峰高×半峰宽 峰高定量 定量测定：定量进样法，归一化法，内标法，外标法，叠加法，转化定量法 返回 液相色谱法 高效液相色谱法概述 与经典液相色谱法比较 与气相色谱法比较 高效液相色谱的特点： 分离效率高 选择性高 检测灵敏度高 分析速度快 高效液相色谱的分类 高效液相色谱的应用范围和局限性 高效液相色谱仪基本装置和组成 高效液相色谱的应用 返回 返回 返回 高效液相色谱的分类 按溶质在两相分离过程的物理化学原理 吸附色谱 分配色谱 离子色谱 体积排阻色谱（凝胶色谱） 亲和色谱 按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类 洗脱法 前沿法 置换法 返回 返回 返回 返回 返回 高效液相色谱的应用范围和局限性 应用范围 高沸点不易挥发，受热不稳定易分解，分子量大，不同极性的有机物，生物活性物质及天然产物，化工产品及环境污染物等等。 方法局限性： 使用多种溶剂，成本高，且易产生污染，梯度洗脱比气相色谱的程序升温复杂 缺少通用的检测器 分析具有多种沸程的石油产品，不能替代气相色谱法 也不能代替中、低压液相色谱法，尤其对受压易分解的生物活性样品 有机混合物的分离 常用的化学分离方法 层析分离法 现代分离技术与分析法 气相色谱法 液相色谱法 层析分离法 柱层析 纸层析 薄层层析 层析中，被分离物质接触到两相物质中固定不动的部分，称为固定 相流动着带被分离物质移动的部分，称为流动相，按固定相和流动 相的性质不同，层析法可分为以下几种： 返回 又称色谱分离法，是被分离的物质通过在固定相和流动相之间 反复分配而最后得到分离的方法。 柱层析 将固定相均匀填在金属或玻璃制成的管中做成层析柱，并以此 进行分离的方法叫柱层析 固定相（吸附剂）的要求： 具有较大的表面积和一定的吸附能力 与流动相及试液中各组分不发生化学反应，并不溶于流动相 应粒度均匀，颗粒细小 常见官能团的极性 常用流动相的极性 返回 纸层析 返回 吸附剂的选择 硅胶：常用吸附剂，其活度与含水量有关 氧化铝：用于非极性化合物的分离，根据制备时的PH不同，又分为碱性、中性和酸性。 聚酰胺；分离易生成氢键的极性化合物 纤维素：极性有机化合物及金属阳离子、阴离子分离 返回 返回 返回 展开剂的选择 一般原理，（Stahl三角形） 微量圆圈法 返回 点样与展开 定性分析用玻璃毛细管点样，定量用微量注射器 样品溶液应为均一体系 返回 定性与定量分析 显色方法：紫外-荧光法，碘熏法、化学法 定性：测定比移值,洗脱后用其他方法定性 定量：溶剂洗脱-分光光度测定，板上原位直接定量（测定斑点面积法），薄层扫描。 返回 返回 载气的选择 常用载气包括氦气、氮气、氩气、二氧化碳和氢气 选择因素：一是价格，二是检测器种类，三是样品的种类和组成 使用常规的填充柱时，流量一般在25~150ml.min-1,使用毛细管柱时，一般在1~25 ml.min-1。 返回 返回 恒温室与分离柱温度控制 恒定温度法：设定柱温等于或略高于样品的平均沸点，分析时间在2~30min 程序升温法:样品组分沸点相差较大时，使柱温以一定的方式上升，得到理想的分离效果 返回 返回 检测器 检测器要求：响应时间快，灵敏度高，具有较大的线性响应范围，通用性强 热导池检测器（TCD） 火焰-电离式检测器（FID） 电子捕获检测法（ECD） 返回 返回 返回