直接氨基酸分析.PDF

无 需 柱 前 或 柱 后 衍 生 的直 接 氨 基 酸 分 析 Dionex 中国有限公司应用研究中心 2002 年 4 月 15 日 无需柱前或柱后衍生的直接氨基酸分析 目录 第一章 直接检测氨基酸分析的原理 1 第 二 章 直 接 氨基酸分析方法检测的主要氨基酸和糖类 14 第三章 直接氨基酸分析的前处理方法综述 17 第五章 直接氨基酸分析方法部分参考文献 26 第六章 直接氨基酸分析的部分典型色谱图 28 Dionex 中国有限公司应用研究中心 无需柱前或柱后衍生的直接氨基酸分析 第 一章 直接检 测氨基酸 分析 的原理 第 一章 直接检 测氨基酸 分析 的原理 1. 直接检测氨基酸分析的原理 氨 基 酸 的 分 子 结 构 常 用 氨 基 酸 在 可 见 光 区 域 ，大 多 数 氨 基 酸 在 紫 外 光 区 域 无 明 显 吸 收 ， 消 光 系 数 很 小 ，检 测 十 分 困 难 ，在 200nm 下 虽 可 检 测 氨 基 酸 ，但 需 要 高 纯 度 溶 剂 作 流 动 相 ，而 且 灵 敏 度 也 不 高 。再 则 氨 基 酸 之 间 极 性 差 别 显 著 ， 侧 基 带 电 荷 的 氨 基 酸 的 高 极 性 往 往 给 HPLC 分 离 带 来 许 多 困 难 。 采 用 化 学 衍 生 技 术 ， 不 仅 使 生 成 的 氨 基 酸 衍 生 物 可 在 紫 外 、 可 见 光 区 域 检 测 ， 或 者 采 用 荧 光 检 测 器 检 测 ，提 高 氨 基 酸 的 检 测 灵 敏 度 ，而 且 增 强 了 氨 基 酸 衍 生 物 的 疏 水 性 ，改 善 HPLC 分 离 。1958 年 ，Moore、Spackman 和 Stein 采 用 离 子 交 换 色 谱 法 和 柱 后 衍 生 技 术 ，研 制 成 功 第 一 台 氨 基 酸 分 析 仪 器 以 来 ，人 们 尝 试 了 各 种 色 谱 分 离 方 法 分 析 氨 基 酸 。近 年 来 ，采 用 反 相 色 谱 法 和 柱 前 衍 生 技 术 ，分 离 分 析 氨 基 酸 已 成 为 快 速 、高 灵 敏 度 和 高 再 现 性 的 方 法 ，可 满 足 蛋 白 质 水 解 氨 基 酸 的 分 析 ，而 且 特 别 适 合 于 生 理 氨 基 酸 的 分 析 ，可 准 确 测 定 样 品 中 各 种 氨 基 酸 ，尤 其 是 带 侧 链 的 氨 基 酸 、疏 水 氨 基 酸 、特 殊 氨 基 酸（ 如 鸟 氨 酸 等 ）以 及 磷 酸 化 氨 基 酸 的 含 量 ，有 助 于 诊 断 遗 传 性 氨 基 酸 代 谢 缺 陷 和 研 究 带 磷 酸 化 氨 基 酸 的 蛋 白 质 的 活 性 。 从 其 结 构 可 见 ，氨 基 酸 为 两 性 分 子 ，在 强 酸 性 溶 液 中 ，氨 基 酸 以 阳 离 子 形 式 存 在 ，可 用 阳 离 子 交 换 分 离 。在 强 碱 性 介 质 中 ，氨 基 酸 以 阴 离 子 形 式 存 在 ， 可 用 阴 离 子 交 换 分 离 。 美 国 Dionex 公 司 发 展 的 直 接 氨 基 酸 分 析 方 法 ，无 需 柱 前 或 柱 后 衍 生 ，直 接 在 新 的 薄 壳 型 薄 壳 型 阴 离 子 交 换 剂 上 阴 离 子 交 换 分 离 ，用 脉 冲 积 分 安 培 检 测 器（ IPAD）检 测（ 详 见 参 考 文 献 1 和 13）。 Dionex 中国有限公司应用研究中心 1 无需柱前或柱后衍生的直接氨基酸分析 2. 直接氨基酸分析方法的突出优点 1 . 革 新 的 氨 基 酸 分 析 方 法 — — 一 次 进 样 分 析 氨 基 酸 ， 氨 基 糖 和 碳 水 化 合 物 2 . 无 需 柱 前 柱 后 衍 生 ，直 接 阴 离 子 或 阳 离