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第九章 吸光光度法
9-1吸光光度法的基本原理
9-2光度计及其基本部件
9-3显色反应及显色条件的选择
9-4吸光度测量条件的选择
9-5吸光度法的应用
提示:
吸光光度法的基本原理:
物质对光的选择吸收、朗伯-比尔定律、偏离比尔定律的原因
光度计及其基本部件: 光度计的结构、主要部件、各部分的作用
用吸光度法进行定量分析
标准曲线法;9-1吸光光度法的基本原理
简介:
吸光光度法:
基于物质对光的选择吸收而建立的分析方法
吸光光度法包括:
比色法、可见分光光度法、紫外分光光度法
比色法:比较待测溶液的颜色深浅测定物质的浓度
分光光度法:计量物质的吸光程度
吸光光度法的优点:
灵敏度高(浓度下限10-5~10-6mol·L-1);相对误
差小于2%~5%;测定迅速;操作简单;应用广泛。∥
;物质对光的选择吸收
物质发光的原因:
在可见光区,不同波长的光呈现不同的颜色
当一束白光通过有色溶液时,一些波长的光被溶
液吸收,另一些波长的光则透过。溶液的颜色由
透射光的波长所决定。吸收光与透射光为互补色
;物质颜色与吸收光颜色的互补关系
; 当一束光照射到某物质或其溶液时,组成该物质
的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”,光子的能量
被分子、原子所吸收,使这些离子由最低能态(基
态)跃迁到较高能态(激发态):
M + hv → M*
(基态) ( 激发态)
光子的能量被分子、原子吸收的条件:
照射光的能量(hv)与被照射物质粒子的基态和
激发态能量之差相当时才能发生吸收
物质对光的选择吸收:
不同物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化
能级,能量差也不相同,物质对光有选择性吸收。
;1;吸收曲线:
将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度有色溶液,测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度(吸光度A),然后以波长为横坐标,以吸光度为纵坐标作图得一曲线;讨论:
不同物质吸收曲线形状和λmax各不
相同(定性依据)
不同浓度同一物质最大吸收波长不
变,浓度增加吸光度值增加(定量依据)
★ 吸收曲线是吸光光度法定量分析时选择测
定波长的重要依据
;光的吸收基本定律----朗伯-比尔定律;例:铁(Ⅱ)质量浓度为5.0×10-4g·L-1的溶液,与1,10 –
邻二氮杂菲反应,生成红色配合物。该配合物在波长
500nm,比色皿厚度为2cm时,测得A=0.19计算1,10 -
邻二氮杂菲亚铁的a及?
解:a =A /bc = 0.19 / 2×5.0×10-4 = 190L·g-1·cm-1
? = Ma = 55.85×190 = 1.1×10-4 L·mol-1·cm-1;标准曲线
入射光在固定液层厚
度及强度的情况下,测定
一系列不同浓度的标准溶
液的吸光度,以吸光度为
纵坐标,以标准溶液浓度
为横坐标作图。根据朗伯
比尔定律应得到一条通过
原点的直线。在相同条件
下测得试液的吸光度,从
标准曲线上查得试液的浓度。; 在实际工作中特别是在溶液浓度较高时,
常会出现标准曲线不成直线的现象。这种现象称为偏离比尔定律;标准曲线
入射光在固定液层厚度及强度的情况下,测定一系列不同浓度的标准溶液的吸光度,以吸光度为纵坐标,以标准溶液浓度为横坐标作图。根据朗伯比尔定律应得到一条通过原点的直线。
在相同条件下测得试液的吸光度,
从标准曲线上查得试液的浓度。;偏离朗伯比尔定律的原因;化学因素引起的???离;9-2光度计及其基本部件;;单光束分光光度计:;光源:
能够发出测量所需波长范围内的连续光谱,要求
具有一定的光强度并在一定时间内能保持稳定;;吸收池:盛装样品试液
玻璃——仅适用于可见光区
石英——适用于紫外和可见光区
要求:匹配性
(对光的吸收和反射应一致);☆双光束分光光度计: ;☆双波长分光光度计 ;9-3显色反应及显色条件的选择;显色反应条件的选择 ;显色剂
;9-4吸光度测量条件的选择
; 控制适当的读数范围 ;透光率的测量误差-ΔT;9-5用吸光光度法进行定量分析;芦丁含量测定; 多组分分析 ;两组分吸收光谱完全重叠—混合样品测定;本章小结:
9-1吸光光度法的基本原理
物质对光的选择吸收、朗伯-比尔定律
9-2光度计及其基本部件
光源、单色器、吸收池、检测器、显示器
9-3显色反应
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