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紫外可见分光光度计原理及操作 潘睿睿 1 2 3 4 紫外-可见分光光度计仪器原理 紫外-可见分光光度计结构及类型 UV-Vis分光光度法的应用和分析条件的选择 目录 UV-Vis分光光度计的保养与故障处理 一、紫外-可见分光光度计仪器原理 g -X-射线 紫外 可见 红外 微波 无线电 200 400 800 3200(nm) 波长 真空紫外 近红外 核磁共振 波长越短，能量越高 原理 1）分子吸收光谱的形成过程： 运动的分子外层电子----吸收外来外来辐射----产生电子能级跃迁---分子吸收谱。 2）由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收 光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。 朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。 原理 入射光I0 透射光 I 光程长b 一、透射率T%? 透射率 T% = I I0 × 100% 朗伯-比耳定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 ? 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即 ? 当浓度以mol/L表示时，称 k 为摩尔吸光系数，以? 表示，即 ? 比a更常用。?越大，表示方法的灵敏度越高。?与波长有关，因此，? 常以??表示。 朗伯-比耳定律 二、紫外-可见分光光度计结构及类型 UV示意图 紫外-可见分光光度计仪器由光源、单色器、吸收池、检测器和数据系统五部分组成。 一、光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯：340~1500 nm，多用在可见光区； 2. 氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。 二、单色器(Monochromator) 在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收池的前面（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解） 仪器结构 三、吸收池(Cell，Container)： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 四、检测器： 硅光电池、PMT、PDA 五、数据系统 它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本类似。 仪器结构 紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束分光光度计。 1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。 类型 2.双光束分光光度计 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。 双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。 类型 3.比例双光束分光光度计 由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带来的误差，但是并不能消除参比造成的影响 类型 6 挡狭缝可选 PC 控制存储、调用方便 可采用复制、拷贝方法在电子表格和字处理软件中处理数据和打印报告 可加载膜厚、动力学、多波长、色彩分析等软件 DDM（双闪耀波长双单色器）降低杂散光，提高长波长区的能量响应（UV-2550） UV-2550的特点 三、UV-Vis分光光度法的应用及分析条件选择 一、定性分析 不同物质结构不同或者说其分子能级的能量(各种能级能量总和)或能量间隔各异，因此不同物质将选择性地吸收不同波长或能量的外来辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。 定性分析具体做法是让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸