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如果测定某组分时,在最大吸收波长处,干扰物质也有吸收或强烈吸收,a为丁二酮肟镍的吸收曲线,其最大吸收波长为470 nm,而从酒石酸铁的吸收曲线b可知在470 nm处也有吸收,因而对镍的测定产生干扰。但在520 nm处虽丁二酮肟镍的灵敏度稍低,而酒石酸铁干扰更小,所以应选择520 nm为入射光波长,以提高方法的准确度和选择性。 丁二酮肟镍(a)和酒石酸铁(b)的吸收曲线 二、 参比溶液的选择 参比溶液 将不含有待测离子的溶液或试剂放入一比色皿中,试液放入另一比色皿中,再调节仪器,使不含待测离子溶液处于T=100%,此种溶液称为参比溶液。 使用参比溶液是为了消除由于比色皿、溶剂及试剂对入射光的反射和吸收等带来的误差。选择参比溶液的总原则是: 使试液的吸光度真正反映待测组分的浓度,一般从以下几方面考虑: 当试液、显色剂及所用的其它试剂在测量波长处均无吸收,仅待测组分与显色剂的反应产物有吸收时,可用去离子水或纯溶剂作参比溶液。 如果显色剂或加入的其它试剂在测量波长处略有吸收,应采用试剂空白(不加试样而其余试剂照加的溶液)作参比溶液。 如显色剂在测量波长处无吸收,但待测试液中共存离子有吸收,如Co2+、MnO4-等,此时可用不加入显色剂的试液为参比溶液,以消除有色离子的干扰。 三、吸光度范围的选择 仪器测量不准确也会造成误差。 在不同吸光度范围内读数对测定带来不同程度的误差。以朗伯-比尔定律为依据,经推导可得: 式中 在有限次测量时,可用 代替,它表示浓度的相对误差;同理dT用ΔT代替,它表示透射比读数的绝对误差。则上式可改写为: 设ΔT=±0.005,代入上式,算出不同透射比读数时浓度的相对误差,结果见下表: 上表数据作图如下: 相对误差与透射比的关系图 当T=0.368时A=0.434,测量的相对误差为最小。当T为15%~65%时,即A在0.2~0.8时测量的相对误差≤±2%,能满足分析测定的要求,故吸光度在0.2~0.8为测量的适宜范围。 目视比色与分光光度计 一、 目视比色法 目视比色法 用眼睛观察、比较待测物质溶液颜色的色度以测定其含量的方法,称为目视比色法。常用的目视比色法是标准系列法。这种方法要使用一套由同种玻璃材料制成的形状、大小相同的平底玻璃管(亦称比色管),依次分别在比色管中加入一系列不同量的标准溶液和待测试液,然后在相同的实验条件下进行显色反应,再加溶剂或水稀释至刻度,充分摇匀后,放置。从管口上方垂直向下观察颜色深浅,将待测试液与标准系列色阶比较,颜色深浅相同者,其待测物质含量亦相同。 例如,环境分析中,测定水质中亚硝酸盐时,通常采用亚硝酸盐和对氨基苯磺酸起重氮化作用,然后与盐酸α-萘胺偶合,生成紫红色染料,进行比色。此法适用于河水等污染不严重水质的测定。 目视标准系列法的优点 仪器简单,操作简便,比色管的液层较厚,而人眼具有辨别很稀的有色溶液颜色的能力,故测定的灵敏度高,适宜于稀溶液中微量组分的测定。 它的缺点 准确度较差,相对误差约为5%~20%。如果试液中还有其它的有色物质,将有干扰,甚至无法测定。 二、 分光光度计 可见光区的吸光光度法,主要使用72型、721型、722型、751型分光光度计等仪器。这些仪器基本上均由光源、单色器或分光系统、比色皿及检测读数系统四大部分组成。 1.72型分光光度计 72型分光光度计主要部件有单色器、检流计和磁饱和稳压器三个部分,采用玻璃棱镜分光获得单色光,其光学系统如动画所示。 2.721型分光光度计 721型分光光度计是在72型仪器的基础上改制成的。将单色器、磁饱和稳压器和检流计三个部件组合成一体,装置紧凑,性能更好,波长范围更宽,波段在360~800 nm,应用更为方便。 下图为721型分光光度计仪器结构示意图。 该仪器的光路系统与72型分光光度计基本相同,只是以光电管和放大器作为光电转换元件取代硒光电池。另外以微安表取代检流计。 3.751型分光光度计 751型分光光度计使用的波长范围,可从紫外光到近红外波段,其波长范围为200~1100 nm。由氘灯和钨灯提供光源。近年来,分光光度计除有上述特点外,还配有专用微处理计算机,可自动扫描,打印图谱,使分光光度法得到更迅速发展。 吸光光度法的应用 吸光光度法主要应用于微量和痕量组分的测定,有时也用于某些高含量物质的分析。近年来用于多组分物质的分析、配合物的组成和稳定常数的测定等。现简要介绍如下。 一、 示差分光光度法 示差分光光度法的基本关系式 当待测组分含量较高,溶液的浓度较大时,其吸光度值往往超出适宜的读数范围,引起较大的测量误差,甚至无法直接测定。此时可采用示差分光
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