第04章六蛋白质化学最终版.pptVIP

蛋白质的化学;目的与要求：;一、蛋白质是构成生物体的基本成分;二、 蛋白质具有多样性的生物学功能;第二节 蛋白质的化学组成;二、蛋白质结构的基本单位;4. 组成蛋白质的氨基酸都是L-氨基酸（甘氨酸例外）;1．非极性R基氨基酸, 8种。 2．极性不带电荷R基氨基酸, 7种。 3．带负电荷的R基氨基酸, 2种 4．带正电荷的R基氨基酸，3种;甘氨酸 Gly G 5.97;色氨酸 Try W 5.89;天冬氨酸 Asp D 2.97;;氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。;pH=pI;C;②.紫外吸收; ;（三）氨基酸的分离与分析;蛋 白 质 的 分 子 结 构;蛋白质的分子结构包括 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构;定义 蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。;肽键是由一个氨基酸的?-羧基与另一个氨基酸的?-氨基脱水缩合而形成的化学键。 二硫键：两个半胱氨酸的-SH通过缩去一份子H2形成 的-S-S-键。;+;* 肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。;N 末端：多肽链中有自由氨基的一端 C 末端：多肽链中有自由羧基的一端 体内多肽和蛋白质生物合成时，是从氨基端开始，延长到羧基端终止。;N末端;GSH过氧化物酶;一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。;N末端氨基酸分析;A.肼解法:;大分子多肽氨基酸顺序的确定：裂解 A.化学裂解法：溴化氰裂解法；羟胺NH2OH裂解法 B.酶裂法:胰蛋白酶，胃蛋白酶等;确定肽段在多肽链中的次序：重叠法 P72 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 16肽，Ｎ端H Ｃ端Ｓ Ａ法裂解：ONS PS EOVE RLA HOWT B法裂解：SEO WTON VERL APS HO 重叠法确定序列：HOWTONSEOVERLAPS ;分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成;按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列;二、蛋白质的构象;c;（二）蛋白质的二级结构;肽键具有部分双键的性质，不能自由旋转。参与肽键的6个原子C?1、C、O、N、H、C?2位于同一平面，称为肽键平面或肽单元 。;2. ?-螺旋;3.?-折叠;β-折叠：顺式和反式中的氢键;4. ?-折角;α角蛋白中的α-螺旋和二硫键;;纤连蛋白分子的结构域 ;结构域特点：;疏水键、离子键、氢键和 范德华力等。 ;;（六）蛋白质的四级结构; 蛋白质结构示意图;三、蛋白质和多肽合成的基本原理;基因工程合成蛋白质;基因工程药品;杂交瘤细胞;蛋白质结构与功能;一级结构是蛋白质生物学功能的基础 ;;剩2-10％ ;例：镰刀形红细胞贫血;二、蛋白质空间结构与功能的关系 ;蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，而一级结构没有变化，称为变构效应。;3.蛋白质构象改变与疾病;不同生物与人的Cytc的AA差异数目;第五节;一、蛋白质分子的大小、形状及分子量测定;2、SDS;;3.生物质谱（MS）测定蛋白质分子量大小;二、蛋白质的变性 ;1、变性的本质;3、变性作用的因素 加热、紫外线、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 ;三.蛋白质的两性电离 ;四、蛋白质的胶体性质 ;2. 低温有机溶剂沉淀蛋白质：0～4℃低温操作，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积，沉淀后，应立即分离，以防蛋白质会变性，也可用乙醇沉淀。 ;3. 加热沉淀反应 4. 重金属盐沉淀法 蛋白质在溶液PH稍大于其等电点时，蛋白质解离成负离子，易与重金属离子结合，生成不溶性的蛋白质盐沉淀。;六、蛋白质的颜色反???;七、蛋白质的免疫学性质;;一、蛋白质的提取; 是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 ;超过滤;2.分子排阻层析;层析的主要设备;3. 密度梯度离心;1.电泳法;;等电聚焦;双向电泳，2DE;2. 离子交换层析：; *亲和层析法： 生物体内有许多高分子化合物，具有和某些对应的专一分子可逆结合的特性。例如，酶蛋白和辅酶、抗原和抗体、激素与其受体等都具有这种特性。这种生物大分子和配基之间形成专一的可解离的络合物的能力称为亲和力。 特点： 1. 高度特异性 2. 可逆行;三、蛋白质的纯度鉴定、含量测定和结构分析;（二）蛋白质含量测定; X射线衍射法