礁膜monostroma nitidu阳m多糖的提取分离 结构和抗凝血活性研究.docxVIP

礁膜(Monostroma 礁膜(Monostroma nitidum)多糖的提取分离、 结构和抗凝血活性研究 摘要 礁膜(Monostroma nitidum)隶属于绿藻门，绿藻纲，礁膜科，礁膜属。多糖 是其主要的生物活性物质。本文以礁膜为原料，对礁膜多糖进行提取、分离纯化， 研究其理化性质、结构和抗凝血活性。 礁膜藻体粉末依次经冷水、热水、稀碱和浓碱液提取，得到五种粗多糖CW、 HWl、HW2、AMl和AM2，提取得率分别是9，1％、30．6％、5．3％、5．5％和3．7％， 总提取率达54．2％。采用苯酚一硫酸法、硫酸钡明胶比浊法、薄层层析、气相色 谱、高效液相色谱等方法对其中三种水提取粗多糖CW、HWl和HW2的理化性 质和单糖组成进行了比较分析。结果表明：总糖含量HW2最高，CW最低；蛋 白含量以CW最高，HWl最低；硫酸基含量以HWl最高，CW最低。三种粗多 糖的单糖组成均以鼠李糖为主，含有少量葡萄糖和木糖，CW含有微量甘露糖， HWl含有微量的半乳糖和甘露糖；糖醛酸的类型均为葡萄糖醛酸。 在对粗多糖理化性质和单糖组成测定的基础上，选取HWl作为研究对象， 采用离子交换色谱和凝胶排阻色谱相结合对其进行分离纯化得到两种纯化多糖 WFl和WF3。采用高效液相色谱法、气相色谱法、红外光谱法对两种多糖的重 均分子量、纯度及单糖组成进行研究。结果表明：多糖WFl和WF3经SB一804HQ 柱洗脱呈单一对称峰，表明两种多糖的纯度较高，重均分子量分别是870 kD和 70 kD，WFl的分子量明显大于WF3；两种多糖的单糖组成均以鼠李糖为主，含 有少量木糖和葡萄糖，另外，WFl含有微量半乳糖，WF3含有微量甘露糖：糖 醛酸类型是葡萄糖醛酸。红外光谱图在1250 era1左右有S=O的伸缩振动吸收峰， 表明了两种多糖均是带有硫酸基的鼠李聚糖。 采用脱硫酸基反应、高碘酸氧化、Smim降解、甲基化反应、气相色谱、高 效液相色谱、红外光谱、核磁共振波谱和气质联用等方法对多糖W-F1和WF3 的结构进行研究。结果表明：WFl的糖链中是以l，2-Rha为主，含有有l，4和 1，3-Rha，硫酸基的位置以C．3、C-4较多，C．2位相对较少，也可能C．3、C4 和C-2均带有硫酸基。WF3的糖链中是以l，3-R．ha为主，含有1，2-Rlm，存在1_2， 3连接的Rha分支点，硫酸基的位置以C．4位较多，C．2、C．3位相对较少，也 3连接的Rha分支点，硫酸基的位置以C．4位较多，C．2、C．3位相对较少，也 可能C．3、C．4和C．2均带有硫酸基。脱硫前后的红外谱图对比解析表明两种多 糖的构型为仪型。核磁共振谱图进一步说明WF3是仅构型，C．3位是糖链的连接 位点，C．2位、C-4位可能有硫酸基取代。 通过活化部分凝血活酶时间(AP州、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT) 分析，对礁膜多糖WFl和WF3的抗凝血活性进行研究。结果表明：WFl和WF3 对APTT和TT均有延长作用，但对PT作用不明显，说明WFl和WF3主要抑 制内源性凝血途径和／或共有凝血途径以及抑制凝血酶活性或纤维蛋白原转化为 纤维蛋白，而对外源性凝血途径没有影响。而且，WFl抗凝血活性明显高于WF3， 这主要是由于它们的分子量、硫酸基含量和结构的差异所引起的。WFl和WF3 的抗凝血活性比肝素低。 本研究提取、分离纯化得到两种礁膜多糖WFl和WF3，关于这两种多糖的 结构到目前为止国内外尚未见研究报道。 本课题为礁膜多糖的研究提供更多的基础资料，为进一步研究其结构与活性 的关系奠定了基础，对促进“海洋糖库”的建设，发展具有我国特色的海洋新药都 有重要意义。 关键词：礁膜；多糖；分离；结构；分子量；抗凝血活性 Studies Studies on extraction，isolation，structure and anticoagulant activity of the sulfated polysaccharides from Monostroma nitidum Abstract Monostroma nitidum is a kind of marine green seaweed．The polysaccharide is its important bioactive substance． In this paper,Monostroma nitidum was extracted by cool water,boiling water and alkali liquid successively．Five kinds of polysaccharides we咒obtained and named as cw,HWI，HW2，AMl and AM