角蛋白降解菌的分离 鉴呢定及其角蛋白酶的性质和应用研究.docxVIP

山东大学硕士学位论文1．4．7洗涤剂添加剂 山东大学硕士学位论文 1．4．7洗涤剂添加剂 ．18 1．4．8其他 。19 1．4．9小结 ．．19 1．5研究目的、意义及内容 19 1．5．1研究目的 ．19 1．5．2研究内容 ．20 第2章产角蛋白酶菌株的筛选及菌种鉴定 21 2．1仪器与试剂 ．21 2．1．1仪器设备 ．21 2．1．2主要试剂与试剂盒 21 2．1．3培养基及其配制 22 2．2菌株的初筛及复筛 23 2．2．1取样 一23 2．2．2菌株的分离纯化 23 2．2．3产蛋白酶菌株的初筛 23 2．2．4复筛及产角蛋白能力比较 24 2．2．5蛋白酶酶活测定 24 2．2．6角蛋白酶酶活测定 24 2．3菌种鉴定 ．24 2．3．1细菌基因组提取 24 2．3．2 16S rRNA基因克隆 25 2．3．3琼脂糖凝胶电泳及胶回收 26 2．3．4转化子测序 ．27 2．4结果与分析 ．28 2．4．1初筛结果 ．28 2．4．2复筛结果 ．32 2．5讨论 ．35 第3章B．subtilis FJ。3．16产酶条件优化及角蛋白酶KerFJ的分离纯化 38 3．1仪器与试剂 ．38 II 万方数据 山东大学硕士学位论文3．1．1仪器设备 山东大学硕士学位论文 3．1．1仪器设备 ．38 3．1．2主要试剂 39 3．1．3发酵培养基及配制 40 3．2 B．subtilis FJ．3．16产酶条件优化 ．40 3．2．1种子液制备 ．40 3．2．2接种量对酶活的影响 40 3．2．3发酵时间对酶活的影响 40 3_2．4培养温度对酶活的影响 40 3．2．5 pH对酶活的影响 ．．41 3．3角蛋白酶KerFJ的分离纯化 41 3．3．1粗酶液提取及硫酸铵分级沉淀 41 3．3．2离子交换层析 ．41 3．3．3酶活测定及电泳检测 43 3．3．4蛋白浓度的测定 44 3．4结果与分析 ．45 3．4．1发酵条件优化结果 45 3．4．2硫酸铵分级沉淀结果 46 3．4．3离子交换层析纯化结果 47 3．4．4目标蛋白纯化结果 48 3．5讨论 ．49 第4章角蛋白酶KerFJ的酶学性质研究及应用初探 50 4．1仪器与试剂 ．．50 4．1．1仪器设备 ．50 4．1．2主要试剂 ．50 4．2角蛋白酶KerFJ的理化性质 51 4．2．1底物特异性 ．51 4．2．2最适反应温度 ．52 4．2．3最适反应pH 53 4．2．4温度稳定性 ．53 III 万方数据 山东大学硕士学位论文4．2．5 山东大学硕士学位论文 4．2．5 pH稳定性 53 4．2．6酶动力学研究 ．53 4．2．7角蛋白酶KerFJ的转膜及N端测序 一54 4．3角蛋白酶KerFJ的耐受性研究 55 4．3．1抑制剂对酶活的影响 55 4．3．2还原剂对酶活的影响 55 4．3．3氧化剂对酶活的影响 55 4．3．4去垢剂对酶活的影响 55 4．3．5金属离子对酶活的影响 56 4．3．6盐浓度对酶活的影响 56 4．3．7商品化洗衣液对酶活的影响 56 4．4角蛋白酶KerFJ的生物降解及应用初探 一56 4．4．1羽毛及羊毛降解 56 4．4．2脱毛实验 ．57 4．4．3去污效果研究 ．．57 4．4．4电镜扫描 ．58 4．5结果与分析 ．58 4．5．1底物特异性 ．58 4．5．2最适反应温度 ．58 4．5．3最适反应pH 59 4．5．4角蛋白酶KerFJ的温度稳定性 60 4．5．5角蛋白酶KerFJ的pH稳定性 60 4．5．6角蛋白酶KerFJ酶动力学研究 61 4．5．7抑制剂、还原剂、氧化剂、去垢剂对角蛋白酶KerFJ酶活性的影响 ．62 4．5．8金属离子对角蛋白酶KerFJ酶活性的影响 ．．64 4．5．9盐浓度对角蛋白酶KerFJ酶活性的影响 ．．65 4．5．10商品化洗衣液对角蛋白酶KerFJ酶活性的影响 65 4．5．1l角蛋白酶KerFJ的生物降解结果 ．66 4．5．12角蛋白酶KerFJ的脱毛能力结果 ．67 Iv 万方数据 山东大学硕士学位论文4．5．1 山东大学硕士学位论文 4．5．1 3角蛋白酶KerFJ的去污能力结果 ．68 4．5．14电镜扫描结果 ．69 4．6讨论 ．70 参考文献 ．72 研究生就读期间发表论文及专利 ～79 致{射 ．81 V 万方数据 山东大学硕士学位论文摘要 山东大学硕士学位论文 摘要 角蛋白是一类广泛存在于自然界的硬性蛋白，主要存在于羽毛、羊毛、动 物的蹄、角、趾甲等部分。由于其结构中除了大量氢键和疏水相互作用，还存 在着大量的由半胱氨酸构成的二硫键，这些二硫键相互交联，使角蛋白的结构 致密，难以被降解利用。 角蛋白酶是一种可以特异性的降