2019年高考生物总复习第一部分非选择题必考五大专题专题五选修部分第15讲基因工程及克隆技术课件.pptVIP

(2)形成重组DNA分子 ①通常是用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA，形成相同粘性末端，然后用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接形成重组DNA分子(如下图)。但在实际操作中，可形成3种不同的连接物：目的基因—载体连接物、载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②因为同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体DNA所得粘性末端全部相同，在DNA连接酶的作用下，目的基因和载体DNA则可任意连接。为了使目的基因与质粒能定向连接，可使用两种不同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒(如下图)。 (3)将重组DNA分子导入受体细胞 受体细胞 植物细胞 动物细胞或原生质体 微生物 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 CaCl2处理法 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入农杆菌→侵染植物细胞→目的基因稳定维持和表达 将重组DNA分子提纯→显微注射入受体细胞→培养、发育→获得具有新性状的生物 CaCl2处理增大细胞壁通透性→重组DNA分子与处理后的受体细胞混合→重组DNA分子进入受体细胞 (4)筛选含有目的基因的受体细胞 ①筛选原因：并不是所有的细胞都接纳了重组DNA分子，还有部分细胞接纳了载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物，甚至有的细胞既没有接纳重组DNA分子，也没有接纳载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②筛选方法：主要是利用载体上的抗生素抗性基因的作用借助一定方法(如影印接种)用选择培养基筛选。 (5)目的基因的表达 若目的基因成功表达，则转基因生物细胞中会产生相应的蛋白质(可用抗原—抗体法检测)，转基因生物会表现相应的性状(如可接种病原体观察转基因生物的抗性)。 考点3　结合植物的克隆考查科学实践能力 5.下面是关于植物克隆的问题。请回答： (1)为培育能高效吸收和富集重金属镉的转基因植物，将野外采得的某植物幼叶消毒后，用酶混合液处理，获得了原生质体。酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是____________。 (2)将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再通过________得到分散的胚性细胞，发育成________，生长发育后获得转基因植株。 (3)愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性的表达能力，下列原因错误的是________。 A.愈伤组织发生染色体畸变 B.愈伤组织不能分散成单细胞 C.愈伤组织中激素平衡发生改变 D.愈伤组织对外源激素敏感性发生改变 解析　(1)甘露醇可以维持溶液的渗透压，以防止失去细胞壁的原生质体吸水胀破。 (2)将愈伤组织放在摇床上，通过液体悬浮培养可以得到分散的单细胞，这些单细胞具有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等胚性细胞的特征，胚性细胞发育成胚状体，进一步形成植株。(3)在长期的培养过程中，愈伤组织可能发生染色体畸变、内部激素平衡改变、对外源激素敏感性改变等变化，而丧失细胞全能性的表达能力。 答案　(1)维持渗透压　(2)液体悬浮培养　胚状体　(3)B * * 第15讲　基因工程及克隆技术 [考试要求]　1.工具酶的发现和基因工程的诞生(/a)。2.基因工程的原理和技术(/b)。3.基因工程的应用(/a)。4.提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案(/c)。5.植物的克隆(/b)。6.动物的克隆(/a)。 1.(2018·浙江4月选考)回答与基因工程和植物克隆有关的问题： (1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切，在切口处形成____________。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成____________，获得重组质粒。 (2)已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是_______________， 从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。 (3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行________，然后接种到培养基中培养，幼胚发生________形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ (答出2点即