《1转基因拟南芥培养》-课件设计（公开）.pptVIP

下载本文档

1
0
约1.15千字
约 15页
2019-01-09 发布于广西
举报
版权申诉

《1转基因拟南芥培养》-课件设计（公开）.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

GFP转基因拟南芥的培养及荧光观察 GFP报告基因发现：绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein， GFP）水母中发现发光蛋白（20世纪60年代） GFP报告基因性质： 238氨基酸组成的单链多肽在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光有什么用呢? 蛋白质在活细胞中的准确定位及动态变化观察（分泌蛋白的分选、亚细胞定位）目的基因目的基因tubulin 拟南芥叶片表皮细胞、保卫细胞中微管骨架的分布情况根部细胞目的基因与载体简介 pGMAP65-1::GFP植物表达载体的构建 ? 导入农杆菌自我复制 ? 浸染花粉转入拟南芥导入成功? 转染成功? tubulin 如何判定载体转化成功，植株内是否有目的基因的表达？ ——载体及植株的筛选卡那霉素抗性培养基筛选卡那霉素: 抗生素影响植物细胞叶绿体和线粒体的蛋白合成,引起植株黄化死亡. 卡那霉素能对转基因植物进行筛选实质上是通过卡那霉素抗性基因起作用的。转基因植物由于含有卡那霉素抗性基因而抑制了卡那霉素的作用，所以通过卡那霉素,转化体就很容易从非转化体中筛选出来。卡那培养基上筛选GFP转基因幼苗生长一个月左右的GFP转基因植株体式荧光显微镜观察GFP转基因植株生长两个月左右的GFP转基因植株 Confocal荧光显微镜观察GFP-tubulin在气孔保卫细胞中的定位材料与试剂材料：GFP转基因拟南芥种子及幼苗试剂：MS培养基(wild type) ； MS卡那抗性培养基(GFP-MAP65)； 75％乙醇； 10％NaClO；无菌水。种子消毒及播种实验流程种子春化（加蒸馏水放入4℃冰箱中过夜）； 75％乙醇润洗一遍，再用75％酒精消毒1min（混匀，尽量将液体吸净，动作要快）； 10％NaClO润洗一遍，再用10％NaClO消毒10min （混匀，尽量将液体吸净，动作要快）；无菌水洗五遍，用牙签将种子点在培养基表面（每皿4-5颗种子尽量均匀）；封膜，做好标记，平放于培养架上培养。注意事项：严格无菌操作！消毒过程动作要快！枪头不要重复使用，物品不要拿出超净台！点种时每个位置尽量只点一颗种子！操作时尽量避免说话和人员走动！注意小组内的配合和小组间的协调！