分子诊说断项目.pptVIP

分子诊断室项目介绍 内 容 HBV DNA荧光定量PCR PCR技术简介 1985年美国PE-cetus公司的人类遗传研究室mullis等人发明了具有划时代意义的PCR技术，从而使人们梦寐以求的体外扩增核酸片段的愿望成为现实。 1988年PE-cetus公司推出了第一台PCR热循环仪，从而使PCR技术的自动化成为现实。 Mullis出因其卓越的贡献与寡核苷酸基因定点诱变的发明者Michael分享了1993年诺贝尔化学奖。 随着PCR技术的日臻成熟1995年出现荧光基因探针杂交定量PCR方法 PCR基本原理 类似DNA的体内复制，以单链DNA为模板，利用DNA聚合酶依赖于模板的特性，在附加的一对寡核苷酸引物之间催化合成互补链的过程。 DNA 合成的必备要素 DNA Polymerase dNTPs single-stranded template primer 实时荧光定量PCR原理 指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累实时监测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。 Ct（cycle threshold)值定义：每个反应管的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。 荧光阈值（threshold)的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即： threshold=10×SD cycle0-15 Ct