中国药科大学毒理学期末重点考研药理复试重点.docVIP

毒理学上半部分总结 目前还存在以下几点需要补充和细化的地方： ⑴代谢活化的两相 ⑵癌基因的分类，具体机制 ⑶细胞恶性转化后的特点 第十六章 药物致突变作用的研究及其试验方法 一、 Ames试验 （一） 原理 组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基 上培养，可产生回复突变，恢复合成组氨酸的能力成为野生型，能在缺乏组氨酸的的培养基上生 长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。 正向突变 鼠伤寒沙门菌组氨酸+ 鼠伤寒沙门菌组氨酸- （野生型） 回复突变 （突变型、营养缺陷型） S9混合液 受试物 （二） 常用试验菌株 菌株名称 突变基因 附加突变 突变类型 修复 LPS R因子 TA97、TA98 hisD △uvrB rfa PKM101 移码突变TA100 hisG △uvrB rfa PKM101 碱基取代TA102 hisG △uvrB rfa PKM101 移码突变、碱基取代注：hisD,组氨酸脱氢酶的结构基因；hisG，磷酸核糖ATP合成酶的基因，TA100和TA98可推荐用于大多数致突变物和致癌物的检测 （三）计量设计 西药＜＝5mg/皿，中药可超过5mg/皿，最低剂量1ug/皿或0.1ug/皿，至少五种不同剂量（药物不溶于水可用DMSO或乙醇作溶剂） （四）对照组 用溶媒作阴性对照；已知致突变作阳性对照；使用间接诱变物作对照时，注意平行设加S9与不加S9的对照。 （五）代谢活化：S9（经诱导剂处理过的肝脏微粒体酶） （六）试验方法：渗入法；点试法 （七）结果判断 1、渗入法：当药物浓度达到5mg/皿仍为阴性者，可以认为是阴性。 2、点试法：凡在滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落，该药物即为致突变物质，如只在平皿上出现少数散在的自发回变菌落，则为阴性。 二、 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验（对象，选材，剂量，实验设计（理解），结果判定，公式（考试不给） ） （一） 动物 1、 细胞：中国仓鼠肺细胞（CHL） 2、 剂量：至少三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度，但最高不要超过10mmol/L， 中低剂量采用倍量稀释法。 3、 代谢活化：S9（哺乳动物肝微粒体酶）进行体外代谢活化。 4、 药物作用时间：非活化组分别作用24和28小时收获细胞，活化组作用6小时以上。 5、 标本制作时间：分别在24和48h收获细胞制作标本，活化组可省略48h时间点。 6、 对照：空白对照、阳性对照、溶剂对照和S9对照。 1 7、 镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构。 8、 结果判定 染色体畸变率（%）= 染色体畸变总数/分析染色体的总数＊100% 细胞畸变率（%）=有染色体畸变的细胞数/分析染色体的细胞总数＊100% 畸变率5%为阴性（-）；畸变率＞5%为可疑（+）；畸变率＞10%为弱阳性（++）；畸变率 ＞20%为中度阳性；畸变率＞50%为强阳性；若某一测试点呈现可重复的并有统计学意义 的增加也为阳性。 （二） 人体外周血淋巴细胞染色体畸变试验 1、 剂量：同动物 2、 对照：溶媒作阴性对照，已知染色体断裂剂作阳性对照。 3、 外周血的采集与培养，静脉2-3ml，加抗凝剂，培养加肝微粒体酶，药物处理24h或48h终止培养前 加秋水仙素获得更多中期细胞 4、 培养细胞的处理，离心，固定 5、 标本制作 6、 染色，Giemsa染色20min 7、 镜检 8、 结果判定 三、啮齿动物微核试验（实验过程，剂量选择，步骤，镜检，如何分辨细胞） （一）原理 骨髓细胞经致突变作用，染色体可发生畸变以致断裂，其断裂的碎片在分裂间期留在子代细 胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆形结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，称之微核。 但骨髓细胞中缺乏代谢活化酶系，对间接诱变物反应较差。有核细胞胞浆少，正常核叶极难与微 粒相辨认，在无核的红细胞中才易于辨认。微核检出率与染色体畸变率之间有明显相关性。 （二）剂量：至少三种剂量，最高剂量以1/2LD50为基准，低剂量结合药效学及