去内皮、冻干辐照脐带静脉管在兔眼深层巩膜切除术中应用的实验研究-时眼科学专业毕业论文.pdf.docxVIP

·中文论著摘要·去内皮、冻千辐照脐带静脉管在兔眼深层巩膜切除术中 ·中文论著摘要· 去内皮、冻千辐照脐带静脉管在兔眼深层巩膜切除术中 应用的实验研究 目 的 青光眼是目前致盲的主要眼病之一，其对视神经和视功能损害呈进展性和不 可逆性。深层巩膜切除术(deep sclerectomy，DS)是一种非穿通性滤过手术。Kozlov (1989)[1]首先提出这一新的抗青光眼手术方法，主要目的是减少传统小梁切除术 后的早期并发症，为开角型青光眼的治疗开辟了新途径，但术后由于瘢痕化而使 手术效果无法维持长久。为了维持减压房的存在，国内外学者于术中切除深层角 巩膜组织后放置了不同的植入材料，如胶原植入物、透明质酸钠凝胶、羊膜、 SK GEL生物胶等，有些取得了较为满意的效果，有些因价格昂贵受到一定的限 制。我院曾将醛化脐带动脉管作为一种新的房水引流物应用于难治性青光眼手术 中，将醛化脐带静脉管作为一种新的房水引流物应用于DS手术中，经动物实验及 临床应用，结果较为满意。但因保存方法、抗原性不确定等原因很难在临床广泛 使用。因此我们将去内皮、冻干辐照人脐静脉管植入兔巩膜下减压室，观察组织 形态学变化、眼压、滤过泡以及并发症等，评价此种植入物的应用价值。 本实验通过建立兔眼深层巩膜小梁切除术的模型，分别运用免疫组织化学和 半定量逆转录一聚合酶链式反应(RToPCR)的方法，观察术后不同时间点手术区组 织中TGF．p 1，及CTGFmRNA和蛋白表达水平，进一步了解TGF．p l，及CTGF在 青光眼滤过术后瘢痕形成过程中的作用，并观察去内皮、冻干辐照人脐带静脉管 植入后对手术区瘢痕形成的影响，探讨其安全性和组织相容性，观察其在深层巩 膜切除术后维持减压房存在的作用。 方法 l、去内皮、冻干辐照HUV的制备 取新鲜脐静脉，0．25％胰蛋白酶水浴去内皮细胞。然后将去内皮的脐静脉置入 ．80。C速冻24h，一70。C5ItHg冷冻干燥6h。双层密封袋真空包装060C0200cGy辐照30s。 ．80。C速冻24h，一70。C5ItHg冷冻干燥6h。双层密封袋真空包装060C0200cGy辐照30s。 室温保存。 2、光镜下观察脐带静脉管组织结构，电镜下观察脐带静脉管组织结构，进行 免疫水平测试。 3、植入兔眼后，术后每同观察切口愈合情况、滤过情况、结膜充血情况及fj{f 房炎症反应， 4、手术后3d，7d，14d各处死8只兔子。不同组的动物处死后立即摘除双眼 球， 10％福尔马林固定，常规脱水、透明、石蜡包埋、切片，HE染色，在并在光 镜下手术区形态学的观察。 5、建立兔眼深层巩膜切除术的模型，植入去内皮、冻干辐照HUV，分别运用 免疫组织化学和半定量逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法，观察术后不同时 间点手术区组织中TGF．P1．及CTGFmRNA和蛋白表达水平 结 果 l、光镜下脐带静脉管组织结构的观察 正常组脐带静脉壁内弹力膜比较完整，在血管横切面上，由于血管壁收缩，内弹 力膜呈叠扇状，处理组内壁上无血管内皮细胞，中膜平滑肌细胞未见明显改变． 弹性纤维量少，散在分布，胶原纤维则交织成网状，密集分布；外膜疏松结缔组织、成 纤维细胞及少量平滑肌细胞结构正常。 2、电镜下脐带静脉管组织结构的观察 正常组：血管内皮细胞呈长梭形或椭圆形，顺血管长轴呈螺旋状排列，未见内膜 下结构。实验组脐静脉内皮细胞已完全去除，显示面为内皮下层以及纤细的胶原纤 维和弹力纤维。 3、HLA．DR抗原检测： 对照组血管免疫组化细胞染色显示血管结构清晰，棕黄色主要表达在内弹力 膜及其血管内皮细胞，整体组织均呈淡黄色。而经处理组阳性表达量明显减少。处 理组的HLA抗原水平下降明显，与对照组相比差异有显著性(P0．01)。 2 4、眼压测定术前24只兔子48只眼平均眼压为(20．26士2．948)mmHg，造模前所有兔子眼 4、眼压测定 术前24只兔子48只眼平均眼压为(20．26士2．948)mmHg，造模前所有兔子眼 压经统计学处理差异均无显著性(Po．05)。实验组术后各时间点眼压低于术前(P O．05)：对照组术后各时间点眼压低于术fi{f(P0．05)；术后3天、7天，对照组与 实验组眼压相比无明显差异(P0．05)，术后10天、14天，对照组与实验组眼压 相比有明显差异(P0．05)，表明在术后一周左右，是否植入HUV，对DS眼压 无明显影响；一周以后，出现差异，具有统计学意义(P0．05))。 5、术后滤过泡及炎症反应观察 7天内两组术区均可见轻度结膜充血，2眼(实验组l眼、对照组2眼，术中 均曾发生微穿透)术后7天内自行恢复；术后高眼压2眼(出现于对照组，术中发生 玻璃体脱出，9—0丝线紧密缝合)。其余实验组和对照组在观察期内无明显炎症反 应，未见伤口