第八讲细胞工程制药技术.pptVIP

第八章 细胞工程制药技术;细胞工程的主要内容;第一节 概述;核移植技术;黑面绵羊去核卵细胞;6;体细胞核移植技术用于治疗人类疾病;核移植;细胞器移植;染色体片段重组“手术”与分离;细胞培养;组织培养;组织培养首先将外植体分离出来，然后在无菌及适当条件下培养以诱导出愈伤组织，另外在愈伤组织随外植体生长一段时间后还需要进行继代培养，以避免代谢产物积累及水分散失等因素的影响。 细胞培养可分为悬浮细胞培养、平板培养、饲养层培养和双层滤纸植板等几类方式。 ;组织培养技术在鉴定感染、酶缺陷、染色体异常，分类脑肿瘤和设计及测验药物和疫苗方面已起了很大作用。 将取自孕妇的细胞进行培养，可判定其体内的胎儿是否存在与唐氏综合症有关的染色体缺陷。 ; 细胞融合技术;细胞融合的发展;细胞融合是指指人为地使两种不同的生物细胞在同一培养器中，用无性的人工方法进行直接接触，产生能同时具有两个亲本细胞有益性状的杂交细胞技术。 人工方法使两个不同的细胞融合，发生体细胞杂交，形成新的杂种细胞。故有人称融合细胞为杂种细胞。;细胞融合过程可分成两个阶段：①异核体阶段(heterokaryon)：异核体是指在融合细胞内含有来自两个亲本的细胞核。异核体中细胞核尚未融合。②杂种细胞形成：当异核体同步进入有丝分裂后，核膜崩溃，来自两个细胞核的染色体结合在一起。融合细胞内只含有一个细胞核，是由来自两个亲本细胞的基因组组合在一起所形成的。此时的细胞就称为杂种细胞。;发展史;1960年，法国的Barski等首先发现不同类型的细胞在混合培养过程中自发融合的现象 1966年，Yerganian进一步用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。从此，人工诱导细胞融合的方法，即被广泛地用于种内、种间、属间、科间、乃至动、植物之间的杂种细胞的构建，而迅速发展成为一项无论在生物学的基础理论研究，或在工、农、医方面的应用，均具有广阔前景的细胞工程技术 。 70年代，童第周在我国率先开展了这方面研究。;诱导方式;电融合;化学融合;病毒融合;实例;第二节　动物细胞工程制药;二、细胞培养;细胞培养过程;小型细胞培养反应器;三、动物细胞药物;细胞因子的主要类型;细胞因子产生途径;干扰素;兽用与医用性腺激素;胰岛素;第三节 抗体制药;一、单克隆抗体;抗体;抗体分子的结构是由二硫键连接起来的约 4 条多肽链。长的一对称为重链，短的一对称为轻链。 氨基端轻链的一半与重链的四分之一的氨基酸组成及排列顺序多变，称为可变区，羧基端轻链的一半和重链的四分之三氨基酸的组成和排列顺序比较恒定，称为恒定区。 可变区中，某些特定位置的氨基酸残基显示更大的变异性，是抗体分子和抗原分子发生特异性结合的关键部位，称为互补决定区，决定了免疫球蛋白分子的异种抗原性。;抗体种类： 第一代抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody) 第二代抗体 单克隆抗体（monoclonal antibody) 第三代抗体 基因工程抗体（genetic engineering antibody);多克隆抗体;单克隆抗体;全世界研制成的对病毒、细菌、寄生虫、肿瘤细胞及各种组织细胞、蛋白质、核酸的单克隆抗体有上万种，在医学、生命科学及医药工业的许多领域得到了广泛应用。 单抗制品的销售量也不断增加，成为生物制品的主要来源之一。;1、用于临床诊断 单克隆抗体检测法，具有特异性高、快速、简便、灵敏等多种优点，因此首先被用来作临床诊断试剂。 在体外测定病人血、尿或分泌物中各种特殊蛋白质的含量，以判断机体是否有病、检测治疗效果等。 最早用于商品的单抗是妊娠诊断试剂。 检测一些受细菌感染血清的诊断试剂、性病以及肿瘤表面抗原一些受细菌感染血清的诊断试剂、性病以及肿瘤表面抗原的诊断试剂，我国已研制出包括乙肝表面抗原、流行性出血热等在内的几十种单抗诊断试剂。;2、治疗试剂 1983年，美国首次报导一例化疗和放疗均证明无效的淋巴瘤患者在使用单抗治疗后得到痊愈，使单抗作为治疗试剂受到了瞩目的重视。 所谓的“生物导弹”：以抗体或抗体分子中的抗原结合部分为载体，将毒素偶联在这种“载体”上，这种分子只与发生癌变的组织或细胞结合，因而它所携带的毒素集中在癌变组织，从而达到特异性杀伤肿瘤的作用。;鼠源性单克隆抗体的改造 ;人-鼠嵌合抗体 ;嵌合抗体;改形抗体 ;小分子抗体 ;二、杂交瘤技术;（一）杂交瘤技术的基本原理;骨髓瘤细胞 (myeloma cells): 恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。 经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株—没有抗体分泌物。 ;脾细胞 (B淋巴细胞);脾细胞 (B淋巴细胞);HAT培养基： H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤 A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途