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第六章 维生素的测定 右江民族医学院 掌握 学习目标 生物监测指标； 测定方法原理 主要步骤和注意事项 生物监测意义 熟悉 理化性质； 代谢途径 了解 食物来源、缺乏及过量症状 概述 脂溶性（A、D、E、K） 水溶性两类（B族、C） 维生素分类： 维生素（vitamin）：是生物体维持正常生命活动必须且无法通过自身合成足够量，需要通过膳食摄取的一类有机化合物的统称。 第一节 维生素A和β-胡萝卜素 一、理化性质 维生素A，脂溶性、主要有维生素A1（视黄醇，retinol）和维生素A3（3-脱氢视黄醇，retinol）两种形式。体内的主要活性形式是视黄醇。在空气中易氧化，加热和光照加速氧化，对酸不稳定。不溶于水，有荧光性，其无水乙醇、环己烷等在自我照射下发出绿色荧光。 第一节 维生素A和β-胡萝卜素 一、理化性质 β-胡萝卜素，植物天然色素，是视黄醇的二聚物和最具活性的维生素A前体。对热、酸碱稳定、易在紫外线和空气总氧化失活。 二、代谢和生物监测指标 维生素A来源 膳食来源：肝脏、肉制品、乳制品、鱼肝油等 维生素A与人健康的关系 缺乏： 过量： 夜盲症、干眼症、角膜软化症 肝损伤、骨异常、脱皮、脱发、复视、呕吐及头痛、胎儿畸形 二、代谢和生物监测指标 我国 血清视黄醇浓度 世界粮农组织（FAO） 正常参考值： 儿童300μg/L 成人400μg/L 视黄醇含量、血浆视黄醇浓度、相对剂量反应 血清β-胡萝卜素 800μg/L 静脉血： 时间 -70℃，避光保存 血清 三、样品的采集和保存 原理： 血清经无水乙醇沉淀蛋白后，正己烷萃取视黄醇及β-胡萝卜素，C18柱色谱分离，紫外检测器监测，保留时间定性，内标法标准曲线法定量。 四、血清中维生素A及β-胡萝卜素的测定 样品处理： 100μL血清中加入100μL内标乙醇溶液，混匀后加入1mL正己烷存取，取上清，挥干，无水乙醇复溶测定。 四、血清中维生素A及β-胡萝卜素的测定 仪器参考条件： 色谱柱：C18色谱柱（150mm*4.6mm,5μm） 流动相 甲醇：水=98:2（临用前脱气） 流速：1.0mL/min UV 波长 ：视黄醇325nm,β-胡萝卜素450nm 注意事项： 四、血清中维生素A及β-胡萝卜素的测定 （1）内标物：维生素A乙酸酯 （2）标准溶液领用标定 （3）无水乙醇作为蛋白质变性剂 （4）缩短保留时间可用该报表了有机溶剂洗脱 （5）前处理可用分散液相微萃取 第二节 维生素D、E、K 一、理化性质 维生素E，有生育酚及生育三烯酚两类，有四种异构体。其中α-生育酚（α-tocopherol）活性最强。在无氧条件下对热稳定，对碱了、紫外线、铁盐等均不稳定。极易被氧化，可保护其他物质不被氧化。 二、代谢和生物监测指标 维生素E来源 膳食摄入：植物油、绿叶蔬菜 吸收： 分布： 小肠 尿液 体内合成：少 排泄： 肝脏储存和代谢 抗衰老、抗肿瘤、保护肝脏、促进受损细胞修复等 生理功能： 二、代谢和生物监测指标 生物监测指标 血清或全血维生素E 静脉血： 时间 -70℃，避光保存 血清 三、样品的采集和保存 四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E 方法 荧光光度法 紫外-可见分光光度法 HPLC GC 检出限：0.08μg/mL 经肝素抗凝的全血样品，乙醇沉淀蛋白后正己烷萃取维生素E，高效液相色谱分离，紫外检测器检验。保留时间定性，外表标准曲线法定量。 四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E 原理： 样品处理： 50μL全血样品中加入200μL无水乙醇，混匀后加入1mL正己烷涡旋混匀，离心取正己烷层800μL，挥干，甲醇复溶测定。 仪器参考条件： 色谱柱：C8（150mm*4.6mm,5μm） 柱温：50℃ 流动相 甲醇：水=98:2 流速：1.0mL/min UV 波长 ：292nm, 四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E 注意事项： （1）正己烷易挥发，环境温度高是冰浴萃取。 （2）可用C18柱更换，流动相可采用甲醇-乙醇=20：80 （4）标准液可用α-生育酚配制，临用标定 （5）可同时检测维生素A 四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E 第三节 维生素B 一、理化性质 维生素B1，又称硫胺素（thiamine），抗神经炎维生素、抗脚气病维生素。白色结晶，溶于水，在酸性溶液中稳定，在pH5的溶液中不稳定。光和热可促其氧化，易被氧化为脱氢硫胺素，即硫色素。应避光、低温保存，不宜久贮。 二、代谢和生物监测指标 维生素B1来源 膳食摄入：粮谷、豆类、干果、绿叶菜、动物内脏及蛋类 代谢： 中枢神经系统 肝代谢生成磷酸酯衍生物 游离硫胺素、单磷酸硫