红霉素大环内酯合成通路在大肠杆菌中的重建.PDFVIP

222 何彰华 等/红霉素大环内酯合成通路在大肠杆菌中的重建 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology February 25, 2012, 28(2): 222−232 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 何彰华，王洋，叶丙雨，师明磊，王东，范秋声，黄芬，赵志虎 军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 何彰华, 王洋, 叶丙雨, 等. 红霉素大环内酯合成通路在大肠杆菌中的重建. 生物工程学报, 2012, 28(2): 222−232. He ZH, Wang Y, Ye BY, et al. Reconstruction of erythromycin macrocyclic lactone synthesis pathway in Escherichia coli . Chin J Biotech, 2012, 28(2): 222−232. 摘 要: 研究在大肠杆菌中重建了红霉素大环内酯 (6-脱氧-红霉内酯 B ，6dEB) 合成通路。先将参与 6dEB 合 成所必需的基因分别克隆于多基因串联共表达载体中，获得单基因重组质粒；再利用载体中 Xba Ⅰ/Spe Ⅰ互为 同尾酶的特性实现相关基因的串联组合，获得多基因重组质粒 pBJ130 和 pBJ144 。将多基因重组质粒共转化 BAP1 ，获得含 6dEB 合成通路的工程菌株 BAP1 (pBJ130/pBJ144) ，SDS检测结果显示通路中各基因均 有明显的表达；进行低温发酵，产物粗提后质谱检测到 6dEB ，其产量约 10 mg/L。表明成功实现了 6dEB 合成 通路在大肠杆菌中的重建，为红霉素大环内酯的改造和修饰提供了平台，也为红霉素合成通路在大肠杆菌中的 完整重建以及聚酮类抗生素的组合性生物合成提供了参考。 关键词: 6dEB ，共表达，SDS，质谱 Reconstruction of erythromycin macrocyclic lactone synthesis pathway in Escherichia coli Zhanghua He, Yang Wang, Bingyu Ye, Minglei Shi, Dong Wang, Qiusheng Fan, Fen Huang, and Zhihu Zhao Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China Abstract: We reconstructed the erythromycin macrocyclic lactone (6-deoxyerythronolide B, 6dEB) synthesis pathway in Escherichia coli . We first cloned all the genes needed to synthesize the 6dEB into multi-gene co-expressed vectors. Then using the recognition sequences of isoschizomers Xba Ⅰ/Spe Ⅰ of vectors, we assembled the related genes into a series multiple-genes recom