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RNAi RNAi 的发现 1995年，康乃尔大学，Su Guo博士 秀丽新小杆线虫（C. elegans）的par-1基因 反义RNA 阻断基因的表达；正义RNA增强基因的表达 但是：二者都同样地切断了par-1 基因的表达途径 1998年，华盛顿卡耐基研究院的Andrew Fire 马萨诸塞大学医学院的Craig Mello 体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起 单链RNA基因抑制效应十分微弱；双链RNA能够高效特异性阻断相应基因的表达。 该小组将这一现象称为RNA干扰（RNA interference ,简称RNAi） RNAi现象被广泛地发现于真菌、拟南芥、水螅、涡虫、锥虫、斑马鱼等大多数真核生物中 RNAi（RNA interference，RNA干扰) *一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型。 *这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。 *近年来，RNA干扰的研究成为热点，预测未来10年间最有可能出重大成果的领域之一，并被《Science》评选为2002年度最重要科技突破的首位。RNAi是细胞本身固有的对抗外源基因及其侵害的一种自我保护现象，是双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程。 RNAi的特点 高效性 Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的dsRNA产生的结果是一样的，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实1～100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。 特异性 Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。 RNAi的特点 需要ATP Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给：一是dsRNA被Dicer所酶切产生siRNA；二是在siRNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。 位置效应 Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组siRNA，hTF167i和hTF372i能够抑制85％～90％的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。结果还表明siRNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。 RNAi的特点 竞争效应 Holen等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。 可传播性 在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。 RNAi技术的应用 在功能基因组研究中，需要对特定基因进行功能丧失或降低突变，以确定其功能。 RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以用于功能基因组的研究。 M. F. Mett等证明含有启动子区的dsRNA同样可以被切割成21-23核苷酸长的片段，从而使启动子失去功能，使其下游基因沉默。 由于多基因家族的各成员之间高度同源，因而使用编码区 RNAi技术很难将各个成员区分开来研究，而多基因家族内的启动子序列通常比编码区变化大，采用启动子区RNAi技术有望将多基因家族的各个成员区分开来研究。这样综合编码区RNAi技术和启动子区RNAi技术的信息即可更全面地了解多基因家族各成员的功能。 二、RNAi技术在基因治疗上的应用 RNAi具有高效率和高特异性的特点，它是基因沉默疗法的理想工具。 小鼠肝细胞的丙型肝炎病毒、HIV-1病毒、脊髓灰质炎病毒 关闭突变的遗传基因 三、新药研发 四、细胞信号传导通路分析 五、植物的种质改良 RNAi技术路线 一、siRNA的设计 化学合成法（chemical synthesis） 体外转录法（in vitro transcription） 长链dsRNA的RNase